巴马小型猪骨髓间充质干细胞的分离培养及生物学特性研究
发布时间：2021-06-24 22:11
干细胞研究自兴起以来,一直是自然科学研究领域的热点。骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）作为一种易于获得培养的成体多潜能干细胞,被认为是干细胞研究的理想种子细胞。猪作为理想的动物模型,其生理结构,脏器大小,营养代谢及病理反应等与人体较为相似。故本研究以成体巴马小型猪骨髓组织为实验材料,利用全骨髓贴壁培养法得到巴马小型猪BMSCs,并对其进行鉴定,重点研究了猪骨髓间充质干细胞的增殖及其多向分化潜能等生物学特性。1、以巴马小型猪骨髓组织为材料,选用全骨髓贴壁培养法分离得到巴马小型猪BMSCs,并使用优化培养体系（L-DMEM基础培养基+10%FBS+2mM L-谷氨酰胺+1Ong/mL bFGF+10ng/mL EGF+100X青链霉素混合液）培养细胞,共培养传代至16代,细胞具有较强的体外自我更新能力。2、利用免疫组织化学法和RT-PCR特异性基因检测法对体外培养的巴马小型猪BMSCs进行检测。结果显示：巴马小型猪BMSCs阳性表达CD29、CD44、CD71、CD73和CD90这五种间充质干细胞特异性表面标记物,阴性表达...
【文章来源】：山西农业大学山西省
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
原代细胞培养情况
但从16代幵始，细胞形态变为长条状或扁圆型，边缘不光滑，传代时，细胞的贴壁能力明显降低，增殖速度明显减慢，细胞出现空泡化、核固缩等衰老特征（图1-4P)。-19 -
对巴马小型猪BMSCs P3代细胞进行特异性标记物免疫组织化学检测。结果见(图1-5)。结果表明：巴马小型猪BMSCs P3代细胞表达MSCs的表面标记物：CD29、CD44和CD73且细胞形态良好，可作为鉴定巴马小型猪BMSCs的依据。議圓圓A:绿色焚光标记B:DAPI C:叠加 D:相差图1-5巴马小型猪BMSCs表面标记免疫焚光检测Fig. 1-5 Identification of BMSCs surface markers using immunofluorescence2.4.2巴马小型猪BMSCs表面标记的RT-PCR检测选取7种巴马小型猪BMSCs特异性基因序列：CD90、CD73、CD71、CD44、CD34、CD31和CD29，对巴马小型猪BMSCs P3、P9和P15进行检测。结果表明：三个代次的巴马小型猪BMSCs阳性表达CD90、CD73、CD7K CD44和CD29,阴性表达内皮细胞特异性标le物CD31和造血干细胞特异性标记物CD34。（图1-6-1)。使用Gel-Pr0 analyzer软件分析，随着细胞代次的升高三个阳性表达基因的表达量呈下降趋势，并且，在同一代次屮，CD73和CD29基因的表达量略高于其他三种基因（图1-6-2)。9-21 -
【参考文献】：
期刊论文
[1]北京油鸡羊膜上皮细胞的分离、培养及分化潜能的研究[J]. 高玉花,张文秀,吴芳春,关伟军,马月辉. 畜牧兽医学报. 2013(02)
[2]骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定[J]. 胡彬,刘晓华,赵林. 中国组织工程研究与临床康复. 2011(27)
[3]淫羊藿在MSCs成脂分化过程中对PPAR γ基因表达影响的实验研究进展[J]. 刘海全,秦佳佳,杨海韵,刘庆思. 中国骨质疏松杂志. 2009(11)
[4]成人骨髓间充质干细胞体外培养及诱导分化的研究进展[J]. 李亚,赵勇刚,梁萍. 河南科技大学学报(医学版). 2009(02)
[5]骨髓源神经干细胞对神经胶质瘤趋化性的研究[J]. 张建富,孟庆海,金澎,刘广义. 中华实验外科杂志. 2009 (04)
[6]骨髓间充质干细胞诱导分化特征[J]. 胡资兵,曾荣,郭伟韬,林颢. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(43)
[7]两种体外分离成人骨髓间充质干细胞方法的比较[J]. 杨芬,杨乃龙. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(03)
[8]体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞[J]. 俞瑞珺,刘海林. 世界华人消化杂志. 2007(34)
[9]骨髓基质干细胞成脂分化的调控及其对骨质疏松的影响[J]. 庞婷婷,崔燎. 中国骨质疏松杂志. 2007(09)
[10]畜禽遗传资源保存理论与方法研究进展[J]. 陈岩锋,谢喜平. 福建畜牧兽医. 2007(04)
硕士论文
[1]人骨髓间充质干细胞体外培养及向肝样细胞诱导分化的实验研究[D]. 陈美娟.浙江大学 2009
[2]大鼠骨髓间充质干细胞诱导成骨及VEGF因子的表达[D]. 金家峰.中国医科大学 2008
[3]成鼠骨髓基质细胞向神经干细胞诱导分化的实验研究[D]. 赵英杰.青岛大学 2006
本文编号：3247914
【文章来源】：山西农业大学山西省
【文章页数】：81 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
原代细胞培养情况
但从16代幵始，细胞形态变为长条状或扁圆型，边缘不光滑，传代时，细胞的贴壁能力明显降低，增殖速度明显减慢，细胞出现空泡化、核固缩等衰老特征（图1-4P)。-19 -
对巴马小型猪BMSCs P3代细胞进行特异性标记物免疫组织化学检测。结果见(图1-5)。结果表明：巴马小型猪BMSCs P3代细胞表达MSCs的表面标记物：CD29、CD44和CD73且细胞形态良好，可作为鉴定巴马小型猪BMSCs的依据。議圓圓A:绿色焚光标记B:DAPI C:叠加 D:相差图1-5巴马小型猪BMSCs表面标记免疫焚光检测Fig. 1-5 Identification of BMSCs surface markers using immunofluorescence2.4.2巴马小型猪BMSCs表面标记的RT-PCR检测选取7种巴马小型猪BMSCs特异性基因序列：CD90、CD73、CD71、CD44、CD34、CD31和CD29，对巴马小型猪BMSCs P3、P9和P15进行检测。结果表明：三个代次的巴马小型猪BMSCs阳性表达CD90、CD73、CD7K CD44和CD29,阴性表达内皮细胞特异性标le物CD31和造血干细胞特异性标记物CD34。（图1-6-1)。使用Gel-Pr0 analyzer软件分析，随着细胞代次的升高三个阳性表达基因的表达量呈下降趋势，并且，在同一代次屮，CD73和CD29基因的表达量略高于其他三种基因（图1-6-2)。9-21 -
【参考文献】：
期刊论文
[1]北京油鸡羊膜上皮细胞的分离、培养及分化潜能的研究[J]. 高玉花,张文秀,吴芳春,关伟军,马月辉. 畜牧兽医学报. 2013(02)
[2]骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定[J]. 胡彬,刘晓华,赵林. 中国组织工程研究与临床康复. 2011(27)
[3]淫羊藿在MSCs成脂分化过程中对PPAR γ基因表达影响的实验研究进展[J]. 刘海全,秦佳佳,杨海韵,刘庆思. 中国骨质疏松杂志. 2009(11)
[4]成人骨髓间充质干细胞体外培养及诱导分化的研究进展[J]. 李亚,赵勇刚,梁萍. 河南科技大学学报(医学版). 2009(02)
[5]骨髓源神经干细胞对神经胶质瘤趋化性的研究[J]. 张建富,孟庆海,金澎,刘广义. 中华实验外科杂志. 2009 (04)
[6]骨髓间充质干细胞诱导分化特征[J]. 胡资兵,曾荣,郭伟韬,林颢. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(43)
[7]两种体外分离成人骨髓间充质干细胞方法的比较[J]. 杨芬,杨乃龙. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(03)
[8]体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为肝样细胞[J]. 俞瑞珺,刘海林. 世界华人消化杂志. 2007(34)
[9]骨髓基质干细胞成脂分化的调控及其对骨质疏松的影响[J]. 庞婷婷,崔燎. 中国骨质疏松杂志. 2007(09)
[10]畜禽遗传资源保存理论与方法研究进展[J]. 陈岩锋,谢喜平. 福建畜牧兽医. 2007(04)
硕士论文
[1]人骨髓间充质干细胞体外培养及向肝样细胞诱导分化的实验研究[D]. 陈美娟.浙江大学 2009
[2]大鼠骨髓间充质干细胞诱导成骨及VEGF因子的表达[D]. 金家峰.中国医科大学 2008
[3]成鼠骨髓基质细胞向神经干细胞诱导分化的实验研究[D]. 赵英杰.青岛大学 2006
本文编号：3247914
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