鼠伤寒沙门氏菌双组分系统arcB基因缺失株的构建及药物敏感性分析

发布时间：2021-06-27 08:12

　　为探究双组分系统arcB基因对鼠伤寒沙门氏菌耐药性的影响,本研究利用Red同源重组系统构建arcB基因缺失株和arcB基因回复株以及通过无缝克隆和重组技术构建3株arcB基因关键位点点突变株。采用微量稀释法测定亲本株、arcB缺失株、回复株及点突变株药物敏感性和体外生长速率,初步分析双组分系统arcB基因对鼠伤寒沙门氏菌耐药性的影响。结果显示,经PCR测序鉴定结果表明构建了鼠伤寒沙门氏菌CVCC541ΔarcB缺失株及其回复株、arcB基因点突变株(arcB^His-292-Ala、arcB^Asp-576-Ala、arcB^His-717-Ala)。生长曲线测定结果显示:缺失株、点突变株和亲本株相比生长速率降低,回复株生长速率回复,与亲本株生长曲线一致;MIC测定结果显示:与亲本株相比,arcB基因缺失株对β-内酰胺类、大环内酯类、四环素类、氯霉素类抗生素的敏感性无变化,但对氨基糖苷类的链霉素、阿米卡星、庆大霉素的耐药性分别增加16、8、4倍;基于该结果测定的各菌株对氨基糖苷类抗生素的MIC结果显示:与亲本株相比,arcB基... 

【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(09)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

各菌株的生长曲线

将含arc B基因的完整ORF及上游423 bp、下游543 bp序列的回复株采用2对引物分别经PCR鉴定。结果显示，利用引物RV-M/M13-47扩增出3 033 bp的两端含有酶切位点的arc B基因片段；利用引物arc B-F/R扩增的2865 bp的arc B基因片段和591 bp的arc B基因缺失片段，与预期结果一致（图2），同时利用引物RV-M/M13-47鉴定质粒p STV28电转入CVCC541Δarc B的重组菌株，扩增出150 bp的质粒片段（图略），测序结果显示扩增序列正确。表明正确构建回复株CVCC541Δarc B/parc B及质粒对照菌株p STV28/CVCC541Δarc B。图2 CVCC541ΔarcB/parcB的PCR鉴定结果

CVCC541ΔarcB/parcB的PCR鉴定结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]Red重组系统用于大肠杆菌基因修饰研究进展[J]. 张雪,温廷益.  中国生物工程杂志. 2008(12)



本文编号：3252478