干酪乳杆菌表达截短的IBV S1蛋白及其免疫原性的研究
发布时间：2021-06-28 20:35
将截短的鸡传染性支气管炎病毒S1基因在干酪乳杆菌中表达,经黏膜途径免疫鸡,诱导机体产生全身系统的免疫应答及局部的黏膜免疫。通过RT-PCR方法扩增IBV S1目的基因片段并连接在pQE-30载体上,表达并纯化蛋白;将S1基因片段构建在穿梭质粒pLA上转化到大肠杆菌表达系统,鉴定正确后,提取质粒电转化到干酪乳杆菌中,所得的重组菌菌株命名为pLA-IBV S1/L.casei。Western blot检测重组菌表达目的蛋白S1,得到约60kDa的融合蛋白,与预期结果相符,说明S1蛋白可以与抗IBV多抗血清发生特异性反应,具有很好反应原性。间接免疫荧光显示重组pLA-S1/L.casei在荧光显微镜下可见绿色荧光,表明重组干酪乳杆菌表达了外源目的蛋白。流式细胞仪可以检测出重组干酪乳杆菌菌体发光,重组干酪乳杆菌表达IBV S1蛋白表达率为86.88%。激光共聚焦可以检测到菌体在荧光显微镜下发光,明视野与绿色荧光Merge显示,是在菌体表面发光,激光共聚焦结果显示外源蛋白能够在干酪乳杆菌表面展示。为了确定重组pLA-S1/L.casei的免疫原性,应用获得的重组干酪乳杆菌经口服和滴鼻点眼两种途径...
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
S1基因PCR扩增
图 2-2 pMD18-T-S1 重组质粒的双酶切鉴定结果tion of the recombinant plasmid pMD18-T-S1 by douM2.DNA Marker DL 2000；1-2.重组质粒经 BamH3.pMD18-T-S1 重组质粒
图 2-3 pMD18-T-S1 重组质粒的 PCR 鉴定 Identification of the recombinant plasmid pMD18-T-S1 bM.DNA 标准 DL 2000；1.PCR 产物；2.阴性对照源性比较
【参考文献】：
期刊论文
[1]牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）核蛋白基因原核表达载体的构建及其重组蛋白的纯化与鉴定[J]. 李艳婷,王珊珊,张露,孙光野,侯喜林. 中国兽医学报. 2016(10)
[2]鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白MHCⅠ分子限制性T细胞表位的鉴定[J]. 朱凤珠,鲁梅,黄庆华,杨少华,黄艳艳,吴家强,谭刘刚,张秀美,崔言顺,许传田. 畜牧兽医学报. 2016(03)
[3]表达鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白的干酪乳杆菌免疫保护效力[J]. 林红丽,侯申达,王嵩,王宇鹏,栾云艳,侯喜林. 生物工程学报. 2014(11)
[4]乳酸菌电转化条件研究[J]. 张旭,崔艳华,张兰威,曲晓军. 兰州大学学报(自然科学版). 2009(S1)
[5]IBV S1基因和IL-2基因双顺反子DNA疫苗的免疫原性研究[J]. 唐梦君,王红宁,周生,黄勇,柳萍,胡慧琼,廖娟. 微生物学报. 2007(06)
[6]动物粘膜免疫与分泌型免疫球蛋白A（综述）[J]. 金光明,杨倩,刘胜兵. 安徽技术师范学院学报. 2003(02)
[7]小鼠肠上皮内淋巴细胞在粘膜免疫应答中的形态学研究[J]. 谢遵江,刘文庆,贺业春,张湛波,赵英. 解剖学报. 1997(03)
博士论文
[1]鸡传染性支气管炎病毒疫苗候选毒株的筛选及评价[D]. 尤永君.中国农业大学 2015
硕士论文
[1]重组干酪乳杆菌pLA-K99-eGFP的构建及免疫功能的研究[D]. 刘卫贞.黑龙江八一农垦大学 2017
[2]干酪乳杆菌表面展示IBDV VP2蛋白及其免疫效力的研究[D]. 林红丽.黑龙江八一农垦大学 2014
[3]共表达ETEC K99、K88重组干酪乳杆菌的构建及其免疫研究[D]. 温丽娟.黑龙江八一农垦大学 2011
本文编号：3255008
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
S1基因PCR扩增
图 2-2 pMD18-T-S1 重组质粒的双酶切鉴定结果tion of the recombinant plasmid pMD18-T-S1 by douM2.DNA Marker DL 2000；1-2.重组质粒经 BamH3.pMD18-T-S1 重组质粒
图 2-3 pMD18-T-S1 重组质粒的 PCR 鉴定 Identification of the recombinant plasmid pMD18-T-S1 bM.DNA 标准 DL 2000；1.PCR 产物；2.阴性对照源性比较
【参考文献】：
期刊论文
[1]牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）核蛋白基因原核表达载体的构建及其重组蛋白的纯化与鉴定[J]. 李艳婷,王珊珊,张露,孙光野,侯喜林. 中国兽医学报. 2016(10)
[2]鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白MHCⅠ分子限制性T细胞表位的鉴定[J]. 朱凤珠,鲁梅,黄庆华,杨少华,黄艳艳,吴家强,谭刘刚,张秀美,崔言顺,许传田. 畜牧兽医学报. 2016(03)
[3]表达鸡传染性法氏囊病毒VP2蛋白的干酪乳杆菌免疫保护效力[J]. 林红丽,侯申达,王嵩,王宇鹏,栾云艳,侯喜林. 生物工程学报. 2014(11)
[4]乳酸菌电转化条件研究[J]. 张旭,崔艳华,张兰威,曲晓军. 兰州大学学报(自然科学版). 2009(S1)
[5]IBV S1基因和IL-2基因双顺反子DNA疫苗的免疫原性研究[J]. 唐梦君,王红宁,周生,黄勇,柳萍,胡慧琼,廖娟. 微生物学报. 2007(06)
[6]动物粘膜免疫与分泌型免疫球蛋白A（综述）[J]. 金光明,杨倩,刘胜兵. 安徽技术师范学院学报. 2003(02)
[7]小鼠肠上皮内淋巴细胞在粘膜免疫应答中的形态学研究[J]. 谢遵江,刘文庆,贺业春,张湛波,赵英. 解剖学报. 1997(03)
博士论文
[1]鸡传染性支气管炎病毒疫苗候选毒株的筛选及评价[D]. 尤永君.中国农业大学 2015
硕士论文
[1]重组干酪乳杆菌pLA-K99-eGFP的构建及免疫功能的研究[D]. 刘卫贞.黑龙江八一农垦大学 2017
[2]干酪乳杆菌表面展示IBDV VP2蛋白及其免疫效力的研究[D]. 林红丽.黑龙江八一农垦大学 2014
[3]共表达ETEC K99、K88重组干酪乳杆菌的构建及其免疫研究[D]. 温丽娟.黑龙江八一农垦大学 2011
本文编号：3255008
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