奶山羊PPARG及其靶基因在乳腺脂肪酸代谢中的功能研究
发布时间：2021-07-01 19:04
过氧化物酶体增殖物激活受体（Peroxisome Proliferator-activated Receptor gamma,PPARG）是目前发现在脂肪组织中调控脂肪酸代谢的核心转录因子,它能调控脂肪酸代谢基因网络,影响甘油三酯的合成,是脂肪细胞脂肪酸沉积的关键因子。但目前山羊泌乳过程中PPARG对乳腺脂肪酸代谢的机理研究却比较稀少。本研究以奶山羊乳腺上皮细胞为材料,利用5种不同的长链脂肪酸（C16,C18,CLA,DHA和EPA）,PPARG的激动剂（ROSI）和抑制剂（GW）处理山羊乳腺上皮细胞,以及结合超表达PPARG具体分析了PPARG对脂肪酸代谢相关基因的表达调控,同时分析了PPARG的靶基因Adipo R1和LPL基因在山羊乳腺上皮细胞中的功能,获得以下结果:1.利用50μM GW（PPARG的抑制剂）处理山羊乳腺上皮细胞后发现,Adipo R1,LPIN1,PPARG,LXRA,LPL,ACSL1,FABP3和FABP4等基因m RNA表达下调;利用50μM ROSI（PPARG的激动剂）处理乳腺上皮细胞后发现,Adipo R1,FADS1,AGPAT6,LPIN1,S...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：96 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
第一章 文献综述
1.1 乳脂的特点
1.2 山羊乳脂和奶牛的区别
1.3 山羊乳脂肪酸组成
1.4 长链脂肪酸的研究进展
1.4.1 饱和脂肪酸的研究进展
1.4.2 不饱和脂肪酸的研究进展
1.5 PPARG的研究进展
1.5.1 PPARG能够控制脂肪生成和脂代谢
1.5.2 PPARG能够调控脂代谢基因的网络通路
1.6 其它转录因子的研究进展
1.6.1 LXRA在脂质代谢中的作用
1.6.2 SREBF1在脂质代谢中的作用
1.7 ADIPOR1和LPL基因的研究进展
1.8 本研究的目的与意义
第二章 长链脂肪酸通过PPARG对脂代谢相关基因表达的影响
2.1 材料与方法
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器
2.1.3 长链脂肪酸、ROSI和GW9662以及GG和T09的制备
2.1.4 细胞培养与处理
2.1.5 RNA提取和质量检测
2.1.6 cDNA第一链的合成
2.1.7 引物设计和RT-qPCR
2.1.8 数据处理
2.2 结果
2.2.1 长链脂肪酸通过PPARG对脂肪酸代谢相关基因的mRNA表达影响
2.2.2 LXRA对脂肪酸代谢相关基因的影响
2.3 讨论
2.3.1 PPARG调控乳腺脂肪生成相关基因网络
2.3.2 长链脂肪酸通过PPARG调控乳腺脂肪生成相关基因
2.4 本章小结
第三章 PPARG在山羊乳腺上皮细胞中的过表达研究及其靶基因的筛选
3.1 材料与方法
3.1.1 主要试剂
3.1.2 主要仪器
3.1.3 重组腺病毒载体构建
3.1.4 超表达病毒Ad-PPARG包装、扩增
3.1.5 细胞培养与处理
3.1.6 RNA提取和质量检测
3.1.7 cDNA第一链的合成
3.1.8 引物设计和RT-qPCR
3.1.9 数据处理
3.2 结果
3.2.1 超表达PPARG影响了脂肪酸合成，去饱和化，三酰甘油合成以及脂滴形成相关基因的mRNA表达
3.2.2 超表达PPARG影响了生物钟相关基因的mRNA表达
3.2.3 超表达PPARG影响了转录调控相关基因的mRNA表达
3.3 讨论
3.3.1 超表达PPARG影响了脂肪酸合成，去饱和化，三酰甘油合成以及脂滴形成相关基因的mRNA表达
3.3.2 超表达PPARG对生物钟相关基因mRNA表达的影响
3.3.3 超表达PPARG对转录调控相关基因mRNA表达的影响
3.3.4 PPARG的下游靶基因AdipoR1和LPL的确定
3.4 本章小结
第四章 ADIPOR1在乳腺上皮细胞上的表达调控研究
4.1 材料和方法
4.1.1 实验样品
4.1.2 主要试剂
4.1.3 引物设计
4.1.4 总RNA提取，cDNA合成以及实时定量
4.1.5 AdipoR1基因cDNA全长的克隆
4.1.6 AdipoR1的生物信息学分析
4.1.7 细胞的处理及siRNA的设计
4.1.8 AdipoR1在各组织中的表达量
4.1.9 数据处理与分析
4.2 结果
4.2.1 山羊AdipoR1基因序列全长的克隆
4.2.2 山羊AdipoR1的同源性分析
4.2.3 山羊AdipoR1的结构分析
4.2.4 AdipoR1在不同组织和泌乳时期的表达分析
4.2.5 奶山羊乳腺上皮细胞中添加胰岛素和催乳素对AdipoR1表达的影响
4.2.6 AdipoR1干扰后对奶山羊乳腺上皮细胞脂肪酸代谢基因的影响
4.3 讨论
4.3.1 AdipoR1基因在不同组织和泌乳时期的表达
4.3.2 胰岛素和催乳素对AdipoR1基因的调控
4.3.3 AdipoR1干扰对脂肪酸代谢相关基因表达的影响
4.4 本章小结
第五章 LPL的组织表达及在山羊乳腺上皮细胞中对脂肪酸合成相关基因的影响
5.1 材料和方法
5.1.1 实验动物和样品采集
5.1.2 主要试剂
5.1.3 LPL基因的克隆，序列分析和组织表达
5.1.4 表达和统计分析
5.1.5 Orlistat和LPL干扰在山羊乳腺上皮细胞中对乳脂合成相关基因的影响
5.2 结果
5.2.1 LPL的克隆和序列分析
5.2.2 LPL蛋白系统进化树的构建
5.2.3 LPL基因在10个组织和两个泌乳阶段的mRNA表达
5.2.4 LPL干扰和Orlistat处理在山羊乳腺上皮细胞中影响了乳脂合成相关基因的表达
5.3 讨论
5.3.1 LPL基因在10个不同组织和两个不同泌乳时期的表达
5.3.2 在山羊乳腺上皮细胞中干扰LPL基因和添加Orlistat对乳脂合成相关基因的影响
5.4 本章小结
结论
本研究的创新点
存在问题及展望
参考文献
附录
缩略词表
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]西农萨能羊胰岛素诱导基因2（INSIG2）的克隆及组织表达分析[J]. 胡仕良,罗军,王慧,赵旺生,李君,孙雨婷,朱江江,石恒波. 农业生物技术学报. 2012(09)
[2]西农萨能奶山羊甘油三酯水解酶基因（ATGL）的cDNA克隆与组织表达分析[J]. 滕炎玲,罗军,李君,赵旺生,王桢,王维,胡仕良. 农业生物技术学报. 2010(06)
本文编号：3259698
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：96 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
英文摘要
第一章 文献综述
1.1 乳脂的特点
1.2 山羊乳脂和奶牛的区别
1.3 山羊乳脂肪酸组成
1.4 长链脂肪酸的研究进展
1.4.1 饱和脂肪酸的研究进展
1.4.2 不饱和脂肪酸的研究进展
1.5 PPARG的研究进展
1.5.1 PPARG能够控制脂肪生成和脂代谢
1.5.2 PPARG能够调控脂代谢基因的网络通路
1.6 其它转录因子的研究进展
1.6.1 LXRA在脂质代谢中的作用
1.6.2 SREBF1在脂质代谢中的作用
1.7 ADIPOR1和LPL基因的研究进展
1.8 本研究的目的与意义
第二章 长链脂肪酸通过PPARG对脂代谢相关基因表达的影响
2.1 材料与方法
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器
2.1.3 长链脂肪酸、ROSI和GW9662以及GG和T09的制备
2.1.4 细胞培养与处理
2.1.5 RNA提取和质量检测
2.1.6 cDNA第一链的合成
2.1.7 引物设计和RT-qPCR
2.1.8 数据处理
2.2 结果
2.2.1 长链脂肪酸通过PPARG对脂肪酸代谢相关基因的mRNA表达影响
2.2.2 LXRA对脂肪酸代谢相关基因的影响
2.3 讨论
2.3.1 PPARG调控乳腺脂肪生成相关基因网络
2.3.2 长链脂肪酸通过PPARG调控乳腺脂肪生成相关基因
2.4 本章小结
第三章 PPARG在山羊乳腺上皮细胞中的过表达研究及其靶基因的筛选
3.1 材料与方法
3.1.1 主要试剂
3.1.2 主要仪器
3.1.3 重组腺病毒载体构建
3.1.4 超表达病毒Ad-PPARG包装、扩增
3.1.5 细胞培养与处理
3.1.6 RNA提取和质量检测
3.1.7 cDNA第一链的合成
3.1.8 引物设计和RT-qPCR
3.1.9 数据处理
3.2 结果
3.2.1 超表达PPARG影响了脂肪酸合成，去饱和化，三酰甘油合成以及脂滴形成相关基因的mRNA表达
3.2.2 超表达PPARG影响了生物钟相关基因的mRNA表达
3.2.3 超表达PPARG影响了转录调控相关基因的mRNA表达
3.3 讨论
3.3.1 超表达PPARG影响了脂肪酸合成，去饱和化，三酰甘油合成以及脂滴形成相关基因的mRNA表达
3.3.2 超表达PPARG对生物钟相关基因mRNA表达的影响
3.3.3 超表达PPARG对转录调控相关基因mRNA表达的影响
3.3.4 PPARG的下游靶基因AdipoR1和LPL的确定
3.4 本章小结
第四章 ADIPOR1在乳腺上皮细胞上的表达调控研究
4.1 材料和方法
4.1.1 实验样品
4.1.2 主要试剂
4.1.3 引物设计
4.1.4 总RNA提取，cDNA合成以及实时定量
4.1.5 AdipoR1基因cDNA全长的克隆
4.1.6 AdipoR1的生物信息学分析
4.1.7 细胞的处理及siRNA的设计
4.1.8 AdipoR1在各组织中的表达量
4.1.9 数据处理与分析
4.2 结果
4.2.1 山羊AdipoR1基因序列全长的克隆
4.2.2 山羊AdipoR1的同源性分析
4.2.3 山羊AdipoR1的结构分析
4.2.4 AdipoR1在不同组织和泌乳时期的表达分析
4.2.5 奶山羊乳腺上皮细胞中添加胰岛素和催乳素对AdipoR1表达的影响
4.2.6 AdipoR1干扰后对奶山羊乳腺上皮细胞脂肪酸代谢基因的影响
4.3 讨论
4.3.1 AdipoR1基因在不同组织和泌乳时期的表达
4.3.2 胰岛素和催乳素对AdipoR1基因的调控
4.3.3 AdipoR1干扰对脂肪酸代谢相关基因表达的影响
4.4 本章小结
第五章 LPL的组织表达及在山羊乳腺上皮细胞中对脂肪酸合成相关基因的影响
5.1 材料和方法
5.1.1 实验动物和样品采集
5.1.2 主要试剂
5.1.3 LPL基因的克隆，序列分析和组织表达
5.1.4 表达和统计分析
5.1.5 Orlistat和LPL干扰在山羊乳腺上皮细胞中对乳脂合成相关基因的影响
5.2 结果
5.2.1 LPL的克隆和序列分析
5.2.2 LPL蛋白系统进化树的构建
5.2.3 LPL基因在10个组织和两个泌乳阶段的mRNA表达
5.2.4 LPL干扰和Orlistat处理在山羊乳腺上皮细胞中影响了乳脂合成相关基因的表达
5.3 讨论
5.3.1 LPL基因在10个不同组织和两个不同泌乳时期的表达
5.3.2 在山羊乳腺上皮细胞中干扰LPL基因和添加Orlistat对乳脂合成相关基因的影响
5.4 本章小结
结论
本研究的创新点
存在问题及展望
参考文献
附录
缩略词表
致谢
作者简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]西农萨能羊胰岛素诱导基因2（INSIG2）的克隆及组织表达分析[J]. 胡仕良,罗军,王慧,赵旺生,李君,孙雨婷,朱江江,石恒波. 农业生物技术学报. 2012(09)
[2]西农萨能奶山羊甘油三酯水解酶基因（ATGL）的cDNA克隆与组织表达分析[J]. 滕炎玲,罗军,李君,赵旺生,王桢,王维,胡仕良. 农业生物技术学报. 2010(06)
本文编号：3259698
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