脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测方法的建立

发布时间：2017-04-25 09:17

  本文关键词：脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测方法的建立，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：畜产品安全是目前养殖业关注的一个热点,把控好畜产品安全的每一关都至关重要。霉菌毒素对动物和人类的健康构成了巨大威胁。脱氧雪腐镰刀菌烯醇又名呕吐毒素,其被认为是谷物或饲料中常见的最危险的霉菌毒素之一,并且在全球范围内呕吐毒素污染谷物和饲料的状况最为常见,形势较为严峻。该毒素可引起急性、慢性、细胞性以及生殖毒性,对动物和人的健康造成很大威胁。且目前市场上常用的检测法,如胶体金快速检测试纸条、ELISA检测试剂盒质量参差不齐,急需改进并寻求新的检测法应用于临床。本文研究建立了两种方法用于脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素的残留检测,并在基础上完成了试剂盒的制备,为饲粮中呕吐毒素的检测提供了依据。两种呕吐毒素残留检测的方法,分别为酶联免疫检测法和化学发光酶免检测法。首先对各反应条件进行了优化:1、通过棋盘法确定了抗原抗体的最适工作比例;2、对两种检测法的缓冲体系与反应模式进行优化,确立了各种反应条件与模式;3、通过以上条件的筛选最终建立合适的标准曲线,确定了最低检测限;4、对以上建立的方法做添加回收实验,筛选合适的回收方法;5、对两种检测法的各种性能指标进行检测,包括准确性、精密性、稳定性以及是否存在交叉反应等,如有必要再对之前的各条件进行优化,最终建立一个完整的检测呕吐毒素的间接竞争检测方法。经过优化后,最终确定呕吐毒素酶免检测试剂盒的检测限(IC15)为10 ppb,线性范围为10-810 ppb,试剂盒的检测灵敏度为60.9 ppb;做12种样品的添加回收实验,回收率在88.7%-116.3%,批内变异在2.14%-9.97%,批间差异最高为10.82%,且试剂盒的稳定性很好,整体变幅在30%以内。呕吐毒素化学发光酶免疫检测方法的检测限为0.5 ppb,灵敏度为1.47 ppb,检测范围为0.5-40.5 ppb,同样做12中谷物与饲料样品的添加回收实验,回收率在78%-118%之间,批内与批间变异均控制在15%以内。稳定性检测结果整体变幅在30%以内。实验表明两种试剂盒均可用于样品的检测,化学发光酶免疫分析法可更明显提高呕吐毒素试剂盒的检测限和灵敏度。
【关键词】：呕吐毒素 残留检测 化学发光酶免检测试剂盒 酶联免疫试剂盒
【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S816.17
【目录】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 第一章 文献综述10-18
• 1.1. 呕吐毒素概述10-15
• 1.1.1. 呕吐毒素理化性质10
• 1.1.2. 呕吐毒素的毒性作用10-12
• 1.1.3. 呕吐毒素检测方法的研究现状12-15
• 1.2. 化学发光免疫分析方法15-18
• 1.2.1. 化学发光免疫分析的基本原理15
• 1.2.2. 化学发光酶免疫分析的应用15-18
• 第二章 呕吐毒素ELISA分析方法的建立18-32
• 2.1. 实验材料18-21
• 2.1.1. 试剂与药品18-19
• 2.1.2. 溶液配制19-20
• 2.1.3. 仪器设备20-21
• 2.2. 实验方法21-24
• 2.2.1. 方法的建立21-22
• 2.2.2. 方法的评价22-24
• 2.3. 结果与分析24-30
• 2.3.1. ELISA方法的建立与优化24-27
• 2.3.2. ELISA方法的评价27-30
• 2.4. 讨论30-31
• 2.4.1. 关于ELISA试剂盒方法的建立30
• 2.4.2. 关于ELISA试剂盒方法的评价30-31
• 2.5. 小结31-32
• 第三章 呕吐毒素化学发光酶免疫分析方法的建立32-45
• 3.1 实验材料32
• 3.1.1 试剂与药品32
• 3.1.2 溶液配制32
• 3.1.3 仪器设备32
• 3.2 实验方法32-36
• 3.2.1 方法的建立32-34
• 3.2.2 方法的评价34-36
• 3.3 结果与分析36-43
• 3.3.1 CLEIA方法的建立与优化36-40
• 3.3.2 CLEIA方法的评价40-43
• 3.4 讨论43-44
• 3.5 小结44-45
• 结论45-46
• 参考文献46-51
• 致谢51-52
• 作者简介52

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1 李晓楠;脱氧雪腐镰刀菌烯醇检测方法的建立[D];西北农林科技大学;2016年

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本文编号：326064