口蹄疫抗原表位缺失标记疫苗候选株的构建及其应用
发布时间：2021-07-03 16:16
随着对FMDV研究深入，有学者发现在FMDV基因组中可以表达外源基因片段。通过对FMDV的基因组进行突变和插入，而达到获得新型产品用于应用的目的。本实验目的在于构建一株含有标记的口蹄疫疫苗候选株用于区分野毒感染与疫苗免疫。为了制备一个抗原表位缺失的口蹄疫标记疫苗株，以含有Asia1型口蹄疫病毒cDNA全长的感染性克隆pAsia1-FMDV作为框架，将3D蛋白的抗原决定簇进行突变。选取3D蛋白中的第27位氨基酸的组氨酸和31位的氨基酸天冬酰胺进行突变，将其分别突变为酪氨酸与精氨酸。把该抗原表位突变，从而导致该表位不能与对应单抗结合，继而获得口蹄疫抗原表位缺失毒株，也称之为负标记毒株。将含有负标记的重组质粒转染BHK-21细胞后，能够观察到明显的细胞病变效应（CPEs），通过RT-PCR和间接免疫荧光试验，表明重组的FMDV被成功拯救出。在对重组FMDV的生物学特性与亲本毒株比较后发现，重组病毒的生物学特性与亲本毒株相似。当重组病毒感染动物后，动物能够迅速的产生特异性的抗病毒抗体，利用间接免疫荧光反应能够在细胞上检测到病毒蛋白。依照重组病毒和亲本毒株的3D蛋白氨基酸序列分别合成了两条长度为...
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
构建质粒简图
甘肃农业大学 2014 届硕士学位论文5图1-2 嵌合VPg的构建简图[27]Fig. 1-2 Schematic representation of the constructions with one copy of VPgs[27].FMDV容易变异，这对FMD的防控十分不利，所以要将FMDV作为载体，稳定的弱毒株是关键。目前许多学者都在尝试将FMDV弱化，不仅能够作为载体，如果毒株稳定性强可以直接制成弱毒苗疫苗。弱化FMDV是未来研究的一个热点方向。如L蛋白的SAP结构突变毒株，发现感染动物后无临床症状也没有排毒带毒现象，并能产生有保护性的抗体[3,32-33]。目前我们实验室利用反向遗传技术已经成功构建了病毒滴度高、抗原匹配性好、免疫保护力强的疫苗株[34]。Seago等[18]的研究为FMDV表达大的外源片段方面带来了新的突破。因此FMDV基因组承载外源片段的能力也是FMDV研究的又一重点。国内外一直致力于FMDV的研究，其目的旨在有效控制FMD的流行。通过引入外源基因对FMDV进行改造可以解决很多现阶段FMD防控的问题。如：我国控制FMD的主要手段是通过免疫灭活疫苗
2.1 重组质粒的扩增和鉴定使用引物3DF与3DR扩增目片段，目的片段大小合适，电泳结果见图2-1。获得的阳性质粒经双酶切鉴定，酶切结果与预期相符，结果如图2-2。图2-1 ：3D蛋白编码区扩增Fig.2-1: Amplification of 3D protein coding regions图2-2 重组质粒prAsia1-3DM酶切鉴定Fig2-2: Identification of genetically engineered recombinant plasmidprAsia1-3DM by enzymatic digestionM ．DL5000 DNA marker 1. prAsia1-FM DV; 2. pAsia1-FM DV.
【参考文献】：
期刊论文
[1]口蹄疫病毒基因组的遗传变异剖析[J]. 陈豪泰,张杰,孙德惠,马丽娜,刘湘涛,刘永生. 中国农业科学. 2008(09)
本文编号：3262921
【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省
【文章页数】：45 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
构建质粒简图
甘肃农业大学 2014 届硕士学位论文5图1-2 嵌合VPg的构建简图[27]Fig. 1-2 Schematic representation of the constructions with one copy of VPgs[27].FMDV容易变异，这对FMD的防控十分不利，所以要将FMDV作为载体，稳定的弱毒株是关键。目前许多学者都在尝试将FMDV弱化，不仅能够作为载体，如果毒株稳定性强可以直接制成弱毒苗疫苗。弱化FMDV是未来研究的一个热点方向。如L蛋白的SAP结构突变毒株，发现感染动物后无临床症状也没有排毒带毒现象，并能产生有保护性的抗体[3,32-33]。目前我们实验室利用反向遗传技术已经成功构建了病毒滴度高、抗原匹配性好、免疫保护力强的疫苗株[34]。Seago等[18]的研究为FMDV表达大的外源片段方面带来了新的突破。因此FMDV基因组承载外源片段的能力也是FMDV研究的又一重点。国内外一直致力于FMDV的研究，其目的旨在有效控制FMD的流行。通过引入外源基因对FMDV进行改造可以解决很多现阶段FMD防控的问题。如：我国控制FMD的主要手段是通过免疫灭活疫苗
2.1 重组质粒的扩增和鉴定使用引物3DF与3DR扩增目片段，目的片段大小合适，电泳结果见图2-1。获得的阳性质粒经双酶切鉴定，酶切结果与预期相符，结果如图2-2。图2-1 ：3D蛋白编码区扩增Fig.2-1: Amplification of 3D protein coding regions图2-2 重组质粒prAsia1-3DM酶切鉴定Fig2-2: Identification of genetically engineered recombinant plasmidprAsia1-3DM by enzymatic digestionM ．DL5000 DNA marker 1. prAsia1-FM DV; 2. pAsia1-FM DV.
【参考文献】：
期刊论文
[1]口蹄疫病毒基因组的遗传变异剖析[J]. 陈豪泰,张杰,孙德惠,马丽娜,刘湘涛,刘永生. 中国农业科学. 2008(09)
本文编号：3262921
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