鸭坦布苏病毒、鸭肠炎病毒和番鸭细小病毒TaqMan三重实时荧光定量PCR检测方法的建立与临床应用

发布时间：2021-07-07 11:51

　　本研究旨在建立一种快速、敏感和高特异性检测鸭坦布苏病毒（DTMUV）、鸭肠炎病毒（DEV）和番鸭细小病毒（MDPV）的TaqMan三重实时荧光定量PCR（q-PCR）的诊断方法并应用于临床疑似样品检测。根据DTMUV的E基因、DEV的UL2基因和MDPV的VP3基因保守区域,分别设计合成了3对特异性引物和探针,在建立单重q-PCR方法的基础上建立了三重q-PCR方法。运用三重q-PCR方法对198份来自江苏和安徽的鸭组织疑似病料进行检测,结果表明,建立的TaqMan三重q-PCR可同时检测这3种病毒,检测灵敏度至少达100个拷贝,相关系数（R²）均在0.99以上,扩增效率为90%～110%。同时,该方法对H9亚型禽流感病毒（H9N2 AIV）、鸭甲肝病毒Ⅰ型（DHAV-1）、番鸭呼肠孤病毒（MDRV）、鸭呼肠孤病毒（DRV）、新城疫病毒（NDV）、鹅细小病毒（GPV）的检测均为阴性,表明该方法具备特异性强、灵敏度高、重复性好和快速等优点。与常规PCR检测方法相比,三重q-PCR方法灵敏度大约高100倍。临床疑似样品检测结果表明DTMUV的检出率最高,3种病毒混合感... 

【文章来源】：江苏农业学报. 2020,36(03)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

建立的DEV单重荧光定量检测方法及多重荧光定量检测方法扩增曲线及标准曲线

图1 建立的DEV单重荧光定量检测方法及多重荧光定量检测方法扩增曲线及标准曲线图3 建立的MDPV单重荧光定量检测方法及多重荧光定量检测方法扩增曲线及标准曲线

建立的MDPV单重荧光定量检测方法及多重荧光定量检测方法扩增曲线及标准曲线

【参考文献】：
期刊论文
[1]山东省鸭类感染猪圆环病毒3型的初步调查[J]. 刘玉伟,辛长勋,王硕,高梅,郑书轩,时建立,彭喆,吴晓燕,王金宝,李俊.  山东农业科学. 2018(05)
[2]广西鸡源H9N2亚型禽流感病毒分离鉴定及遗传进化分析[J]. 张艳雯,何永权,吴云月,于冬玲,曾文榜,宁志鹏.  南方农业学报. 2018(04)
[3]鸭源H9N2亚型禽流感病毒RT-PCR检测方法的建立[J]. 王永娟,董亚青,郭方超,左伟勇,孟婷.  江苏农业科学. 2018(01)
[4]鸭瘟强毒人工感染雏鸭的显微和超微病理学变化[J]. 刘忠伟,杨颖,江楠,罗乐,文明.  江苏农业科学. 2017(16)
[5]应用二重实时荧光定量RT-PCR鉴别坦布苏病毒与产蛋下降综合征病毒[J]. 曾婷婷,谢芝勋,谢丽基,邓显文,谢志勤,罗思思,刘加波,黄莉,黄娇玲.  中国家禽. 2015(01)
[6]鸭坦布苏病毒和鸭瘟病毒二重荧光定量RT-PCR方法的建立[J]. 张艳芳,谢芝勋,谢丽基,刘加波,范晴,庞耀珊,罗思思,邓显文,谢志勤.  中国畜牧兽医. 2014(03)
[7]新型黄病毒在种鹅中垂直传播的研究[J]. 赵冬敏,黄欣梅,刘宇卓,张敬峰,李银.  南方农业学报. 2012(01)
[8]间接免疫荧光染色检测石蜡切片中的鸭病毒性肠炎病毒和抗原定位[J]. 程安春,韩晓英,朱德康,汪铭书,袁桂萍,廖永洪,徐超.  中国兽医学报. 2008(08)
[9]番鸭细小病毒与鹅细小病毒PCR鉴别诊断方法的建立[J]. 刘家森,姜骞,司昌德,甘一迪,韩凌霞,曲连东.  中国兽医科学. 2007(06)



本文编号：3269582