单细胞分析宿主细胞异质性对口蹄疫病毒感染的影响

发布时间：2021-07-08 21:43

　　细胞异质性在很多生命活动中普遍存在,即使细胞群体含有相同的基因型,甚至来源于同一个克隆,它们都存在异质性,如单细胞生物中呈现的形态各异、高等生物存在的细胞极性分化、细胞离体培养常有的表型差异、生长差异和周期差异等。细胞异质性是不同功能表型的混合细胞群体以一种动态平衡的方式存在,然后在不同状态下经历表型的转变。细胞异质性可由内在因素引起,如基因组转录和翻译的随机突变、基因型和表观遗传控制的细胞形态转变等,也可能由外在因素引起,如环境的改变导致相应的适应性转变。然而,无论内在还是外在因素引起的细胞异质性都不同程度地影响病毒感染。深入研究细胞异质性的形成和转变机制,对揭示病毒感染促进或制约宿主细胞异质性形成机理,探讨病毒感染的发生、发展规律具有重要的科学意义和广泛的应用价值。本文首先通过噬斑纯化的方法纯化了野生型以及形成持续感染的口蹄疫病毒株,并对其噬斑形成能力进行对比,证明持续感染病毒的噬斑形成能力比野生型口蹄疫病毒弱,进一步对这两种病毒的全基因组开放式阅读框序列进行测序,比对结果发现持续感染的口蹄疫病毒共发生了 34个氨基酸突变,其中VP1蛋白突变率最高,占总突变率的32.35%。持续感... 

【文章来源】：武汉大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：116 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图１－１．?ＦＭＤＶ的基因组和病毒的结构示意图（Ｊａｍａｌ?ａｎｄ?Ｂｅｌｓｈａｍ，?２０１３）??

表２－１蚀斑计数表??病毒稀释度?第一组?第二组?第三组?平均数??（ＰＦＵ）?（ＰＦＵ）?（ＰＦＵ）??１〇－３?无法计数?无法计数?无法计数?－??１０４?４１?２７?４４?４１??１０５?４?４?８?５．４??Ｎｅｇａｔｉｖｅ?０?０?０?０??同样取ｌｍｌ的病毒原液进行ＴＣＩＤ５〇试验，如表２－２所示，统计出不同稀释度??病毒液细胞发生ＣＰＥ的阳性率，通过公式计算：??ｌｇＴＣＩＤ５０＝－５＋?（１０００／〇－５０％）?／?（１００％－２５０／〇）?ｘ?（－１）?＝－５．７??３２??

武汉大学博士学位论文??２．３．３比较持续感染及野生型口蹄疫病毒的噬斑形成能力??将纯化后扩增的ＦＭＤＶ－Ｏｐ４３及ｗｔ?ＦＭＤＶ再次进行噬斑试验验证其噬斑形成??能力。结果显示，病毒感染２４ｈ后，相同稀释度的ｗｔＦＭＤＶ大、小噬斑病毒形成??的噬斑大小并无明显差异，而挑取的持续感染病毒大噬斑和小噬斑病毒并未形成??噬斑；直至病毒感染３６ｈ，持续感染病毒的大噬斑和小噬斑病毒才产生明显的噬斑，??并且大噬斑病毒形成的噬斑比小噻斑病毒形成的噬斑大，而ｗｔ?ＦＭＤＶ在该时间点??形成的噬斑则更大（图２－３）。结果表明持续感染病毒的噬斑形成能力比野生型??ＦＭＤＶ弱，即持续感染病毒的杀细胞能力较弱。ＦＭＤＶ持续感染细胞可能是由于??ＦＭＤＶ－Ｏｐ裂解细胞能力弱，增加了细胞存活率而形成的。??－－＾＇／＇


本文编号：3272386