鸡ERα基因启动子的活性分析及其剪切体的时空表达研究

发布时间：2021-07-09 05:33

　　禽类性别分化和性腺发育一直是禽类发育生物学研究的热点,但具体的性别分化及性腺发育的调控机制还有待进一步研究。研究发现与生殖系统发育及其功能维持密切相关的雌激素受体基因ERa在鸡性别决定早期性腺发育中有重要作用。已有研究表明ERa基因具有多个启动子,且不同启动子的转录产物不同（即存在不同剪切体）,本研究首先拟对ERa基因5’上游区域进行研究,找出多个启动子的活性差异,在此基础上研究单个启动子调控的选择性剪切变体在鸡胚发育期及成年开产期不同组织中的表达差异,并与多个启动子调控的ERa总表达进行比对,探究二者之间的关系。实验采用双荧光素酶报告基因系统的方法,对构建的ERa基因启动子缺失片段进行启动子活性检测；用半定量RT-PCR的方法对剪切体和ERa的表达进行定量分析。具体结果如下：1、用3种细胞对含启动子缺失片段的双荧光素酶报告载体进行转染实验并进行启动子活性检测,发现DF1细胞的转染实验未检测出启动子活性,PK15和Hela细胞的转染实验检测出启动子活性差异,活性依次为ERaPF1（+52～+216）﹥ERαPF3（-238～+216）﹥ERαPF4（-403～+216）>﹥ERα... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
縮略词表
1 前言
    1.1 研究问题的由来
    1.2 禽类性别决定及性腺发育相关的研究进展
        1.2.1 禽类性别决定及性腺分化
        1.2.2 性激素与禽类性别分化的关系
        1.2.3 核激素受体及ERα的研究进展
    1.3 选择性剪切及ERα选择性剪切的相关研究进展
        1.3.1 选择性剪切
        1.3.2 ERα基因的选择性剪切
    1.4 研究目的与意义
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 研究意义
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 主要试剂及溶液的配制
        2.1.2 主要器材
        2.1.3 生物信息学分析相关的软件和数据库
    2.2 方法
        2.2.1 鸡ERα基因启动子活性检测
        2.2.2 半定量RT-PCR检测ERα基因不同剪切体
3 结果与分析
    3.1 ERα基因不同启动子缺失片段的活性检测
        3.1.1 启动子缺失片段的扩增
        3.1.2 荧光素酶报告基因载体的构建
        3.1.3 细胞培养及转染
    3.2 ERα基因不同剪切体时空表达的检测
        3.2.1 鸡胚组织提取、性别鉴定、RNA提取及cDNA的制备
        3.2.2 不同时期不同组织中C剪切体的半定量检测
        3.2.3 不同时期不同组织中D剪切体的半定量检测
4 讨论
    4.1 不同细胞中ERα基因启动子活性检测的研究
    4.2 不同时期肝脏中ERα基因及其C剪切体表达的研究
    4.3 6月龄成年鸡中ERα基因及其D剪切体表达的研究
    4.4 不同胚胎期中ERα基因及其D剪切体表达的研究
5 小结
    5.1 本研究所取得的结果
    5.2 下一步需要研究的问题
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡性别决定机制的研究进展[J]. 贾存灵,魏泽辉.  中国家禽. 2010(12)
[2]鸡性别决定机制及相关基因研究进展[J]. 孟和,潘玉春.  动物学杂志. 2005(02)
[3]鸡胚PGCs迁移与性腺发育关系的研究[J]. 李碧春,陈国宏,赵东伟,王克华,钱菊汾.  扬州大学学报. 2002(01)



本文编号：3273134