新城疫病毒对宿主核糖体蛋白RPL11降解机制的初步研究

发布时间：2021-07-09 12:19

　　本研究使用蛋白标记药物Puromycin标记NDV感染后DF-1细胞新合成的蛋白,发现NDV感染后新蛋白合成量显著下调,而病毒NP蛋白的含量却随感染时间的延长呈增加趋势。为探究NDV的感染对DF-1细胞核糖体大亚基L11蛋白（RPL 11）表达水平的影响,分别收获NDV（MOI 1）感染后不同时间（8 h、16 h、24 h和32 h）和不同剂量NDV（MOI 1、0.1）感染后相同时间的细胞样品,采用western blot、激光共聚焦、荧光定量PCR分别检测内源性RPL 11的蛋白表达和mRNA转录水平。Western blot结果显示NDV感染后核糖体蛋白RPL 11的表达量显著降低,并且与病毒感染时间和感染剂量呈正相关。激光共聚焦结果显示,NDV感染后细胞核与细胞质中的RPL 11荧光信号均明显减弱。但荧光定量PCR结果显示,该基因的转录水平却无明显变化,表明其蛋白表达量的减少发生在翻译后修饰环节。构建重组质粒pFlag-RPL 11转染DF-1细胞24 h后再感染不同剂量NDV（MOI 1、0.1）,通过western blot检测外源性RPL 11的表达水平。结果显示外源性... 

【文章来源】：中国预防兽医学报. 2020,42(10)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

NDV感染后puromycin标记蛋白含量的检测结果

构建的重组质粒p Flag-RPL11经测序鉴定正确后转染DF-1细胞，24 h后收集细胞蛋白样品。western blot结果显示，转染重组质粒的细胞相对转染空质粒的对照细胞在20 ku～25 ku的位置出现了特异性条带与预期一致（图4A），表明重组质粒在DF-1细胞中表达了RPL11蛋白。将重组质粒转染DF-1细胞24 h后，再分别以不同剂量的NDV感染24 h,western blot检测结果显示与对照细胞相比，NDV感染细胞的外源RPL11的表达量明显下降，且下降程度随着感染病毒剂量的增加而更明显，病毒NP蛋白的表达量却在增加（图4B）。以上结果表明NDV感染细胞后也可以导致外源RPL11蛋白表达水平下降，且该下降程度与病毒的感染剂量呈正相关。图3 NDV感染后RPL11蛋白分布变化的激光共聚焦检测结果

NDV感染后RPL11蛋白分布变化的激光共聚焦检测结果

【参考文献】：
期刊论文
[1]26S蛋白酶体调控微管蛋白的降解[J]. 潘婷,杨慕童,刘阳轩,孙秀强,涂升斌,Jan Smalle,汪松虎.  四川大学学报(自然科学版). 2019(02)
[2]自噬与泛素化蛋白降解途径的分子机制及其功能[J]. 陈科,程汉华,周荣家.  遗传. 2012(01)



本文编号：3273733