新型番鸭呼肠孤病毒σC蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立及应用
发布时间：2021-07-12 05:17
禽呼肠孤病毒σC蛋白是病毒外壳蛋白的主要成分，位于病毒表面，是病毒型特异性抗原，能够刺激机体产生保护性中和抗体，与病毒及病毒的吸附、增殖和合胞体的形成有关，能够产生CPE，引起细胞凋亡。因此，σC蛋白是建立抗体检测方法的重要目标蛋白。新型番鸭呼肠孤病毒从2001年开始出现，主要分布在在浙江、江苏、福建、广东和广西等地，鸭鹅主要发生以肝、脾出现大量出血性坏死灶为特征，又被称为“出血性坏死性肝炎”，发病日龄以510龄为主，死亡率在2%15%，各品种鸭（如番鸭、麻鸭、北京鸭等）和鹅均可感染。新型番鸭呼肠孤病毒与经典番鸭呼肠孤病毒同属于呼肠孤病毒科，正呼肠孤病毒属，禽呼肠孤病毒群。本研究利用新型番鸭呼肠孤病毒基因组模板，采用RT-PCR技术扩增σC基因，将扩增产物克隆到pET-28a（+）载体中，得到pET-28a-σC重组载体，通过E. coli原核表达系统对其进行表达，得到大小为36kDa的σC蛋白，并且通过蛋白免疫印迹分析与间接免疫荧光对σC蛋白的抗原特性进行初步分析，实验结果表明新型番鸭呼肠孤病毒σC蛋白具有良好的反应原性。将纯化后的新型番鸭...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
-MDRV病毒粒子电镜照片
815-12 85.8 97.4 87.9 98.0 79.7 93.0 95.6 96.9 67.3 75.6 85.9 J18 97.1 99.6 88.0 99.0 98.4 99.3 97.5 98.5 97.9 99.0 99.403G 86.8 98.0 98.2 97.5 96.8 98.6 96.4 97.0 87.9 96.1 94.8毒 σA σB σC/σ1 P10 P18/NSP nt aa nt aa nt aa nt aa nt aa S1133 77.1 90.4 59.8 68.9 38.3 29.4 48.3 38.0 31.6 14.1 78.815-12 87.5 98.1 61.1 68.7 52.9 41.6 35.9 7.9 NE NE 84.J18 99.6 100 97.7 97.5 97.4 97.2 98.0 100 97.3 96.9 93.03G 88.8 97.6 94.7 94.6 97.4 97.5 98.3 100 96.7 95.7 94.活 48~51 周，在 4℃可存活 3 年以上，在-20℃可存活 4 年以上，在-80℃可存上；70%乙醇、0.5%有机碘和 5%过氧化氢溶液可灭活病毒（陈华美，2006）
-MDRV 病毒培养N-MDRV能够在DF-1细胞生长，病毒的效价可以通过DF-1细胞的rahi et al., 1981; Okuno et al., 1984）。将病毒接种于培养在六孔板的24h开始出现细胞病变，表现为单层细胞凝聚成团，产生大量的合非常明显，可见大量细胞脱落，漂浮在上清中，细胞变形（见13）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]番鸭呼肠孤病毒套式RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 李启强. 中国畜牧兽医. 2012(10)
[2]新型鸭呼肠孤病毒病灭活疫苗的制备及免疫原性分析[J]. 陈仕龙,李兆龙,林锋强,王劭,程晓霞,朱小丽,陈少莺. 福建农业学报. 2012(05)
[3]番鸭呼肠孤病毒病活疫苗诱导的免疫应答分析[J]. 林锋强,陈仕龙,陈少莺,朱小丽,程晓霞,胡奇林,王劭. 畜牧兽医学报. 2011(12)
[4]禽呼肠孤病毒病的研究进展[J]. 李巨银,胡新岗,魏宁. 当代畜禽养殖业. 2011(10)
[5]禽呼肠孤病毒σC基因在杆状病毒表达系统中的表达及其活性鉴定[J]. 孙美玉,秦立廷,高玉龙,祁小乐,高宏雷,王永强,王笑梅. 病毒学报. 2011(04)
[6]新型鸭呼肠孤病毒NP03株S3基因序列分析[J]. 王劭,陈少莺,陈仕龙,朱小丽,林锋强,江斌,程晓霞,张世忠,李兆龙. 农业生物技术学报. 2010(03)
[7]番鸭呼肠孤病毒MW9710株δC蛋白基因在毕赤酵母中表达[J]. 欧阳岁东,林锋强,王劭,陈仕龙,程晓霞,朱小丽,胡奇林,陈少莺. 福建农业学报. 2010(03)
[8]禽（番鸭）呼肠孤病毒TaqMan探针荧光RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 严进,关育芳,李中华,吴异健,吴宝成. 中国预防兽医学报. 2009(11)
[9]一种新的鸭病(暂名鸭出血性坏死性肝炎)病原学研究初报[J]. 陈少莺,陈仕龙,林锋强,江斌,王劭,程晓霞,朱小丽,张世忠,李兆龙,程由铨. 中国农学通报. 2009(16)
[10]禽呼肠孤病毒血清学相关性及S3基因序列同源性分析[J]. 吴异健,梁英,王劭,李文迹,李江森,吴宝成. 福建农林大学学报(自然科学版). 2008(06)
硕士论文
[1]番鸭呼肠孤病毒σC基因真核表达及其间接ELISA方法的建立[D]. 邹光盛.福建农林大学 2007
本文编号：3279284
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
-MDRV病毒粒子电镜照片
815-12 85.8 97.4 87.9 98.0 79.7 93.0 95.6 96.9 67.3 75.6 85.9 J18 97.1 99.6 88.0 99.0 98.4 99.3 97.5 98.5 97.9 99.0 99.403G 86.8 98.0 98.2 97.5 96.8 98.6 96.4 97.0 87.9 96.1 94.8毒 σA σB σC/σ1 P10 P18/NSP nt aa nt aa nt aa nt aa nt aa S1133 77.1 90.4 59.8 68.9 38.3 29.4 48.3 38.0 31.6 14.1 78.815-12 87.5 98.1 61.1 68.7 52.9 41.6 35.9 7.9 NE NE 84.J18 99.6 100 97.7 97.5 97.4 97.2 98.0 100 97.3 96.9 93.03G 88.8 97.6 94.7 94.6 97.4 97.5 98.3 100 96.7 95.7 94.活 48~51 周，在 4℃可存活 3 年以上，在-20℃可存活 4 年以上，在-80℃可存上；70%乙醇、0.5%有机碘和 5%过氧化氢溶液可灭活病毒（陈华美，2006）
-MDRV 病毒培养N-MDRV能够在DF-1细胞生长，病毒的效价可以通过DF-1细胞的rahi et al., 1981; Okuno et al., 1984）。将病毒接种于培养在六孔板的24h开始出现细胞病变，表现为单层细胞凝聚成团，产生大量的合非常明显，可见大量细胞脱落，漂浮在上清中，细胞变形（见13）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]番鸭呼肠孤病毒套式RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 李启强. 中国畜牧兽医. 2012(10)
[2]新型鸭呼肠孤病毒病灭活疫苗的制备及免疫原性分析[J]. 陈仕龙,李兆龙,林锋强,王劭,程晓霞,朱小丽,陈少莺. 福建农业学报. 2012(05)
[3]番鸭呼肠孤病毒病活疫苗诱导的免疫应答分析[J]. 林锋强,陈仕龙,陈少莺,朱小丽,程晓霞,胡奇林,王劭. 畜牧兽医学报. 2011(12)
[4]禽呼肠孤病毒病的研究进展[J]. 李巨银,胡新岗,魏宁. 当代畜禽养殖业. 2011(10)
[5]禽呼肠孤病毒σC基因在杆状病毒表达系统中的表达及其活性鉴定[J]. 孙美玉,秦立廷,高玉龙,祁小乐,高宏雷,王永强,王笑梅. 病毒学报. 2011(04)
[6]新型鸭呼肠孤病毒NP03株S3基因序列分析[J]. 王劭,陈少莺,陈仕龙,朱小丽,林锋强,江斌,程晓霞,张世忠,李兆龙. 农业生物技术学报. 2010(03)
[7]番鸭呼肠孤病毒MW9710株δC蛋白基因在毕赤酵母中表达[J]. 欧阳岁东,林锋强,王劭,陈仕龙,程晓霞,朱小丽,胡奇林,陈少莺. 福建农业学报. 2010(03)
[8]禽（番鸭）呼肠孤病毒TaqMan探针荧光RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 严进,关育芳,李中华,吴异健,吴宝成. 中国预防兽医学报. 2009(11)
[9]一种新的鸭病(暂名鸭出血性坏死性肝炎)病原学研究初报[J]. 陈少莺,陈仕龙,林锋强,江斌,王劭,程晓霞,朱小丽,张世忠,李兆龙,程由铨. 中国农学通报. 2009(16)
[10]禽呼肠孤病毒血清学相关性及S3基因序列同源性分析[J]. 吴异健,梁英,王劭,李文迹,李江森,吴宝成. 福建农林大学学报(自然科学版). 2008(06)
硕士论文
[1]番鸭呼肠孤病毒σC基因真核表达及其间接ELISA方法的建立[D]. 邹光盛.福建农林大学 2007
本文编号：3279284
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