猪源链球菌的分离鉴定与SEZ保护性抗原蛋白的研究

发布时间：2021-07-12 13:47

　　猪链球菌病（swine streptococosis）是由猪链球菌、马链球菌兽疫亚种等多种群的链球菌引起猪群发病的传染病,且该病为人畜共患病,其病原可经破损的皮肤及呼吸道传染给人,严重感染时可引起人的死亡。我国当前疫苗对由多种病原引起的猪链球菌病保护不够,调查当地猪链球菌病流行病原种类和研制多效保护的亚单位疫苗很有必要。本研究分为两部分,一是了解湖南部分规模猪场猪链球菌病病原种类。根据链球菌16SrRNA基因的保守序列,设计链球菌特异性引物、及能区分猪链球菌和马链球菌兽疫亚种的鉴别引物；同时,根据猪链球菌不同血清型的荚膜抗原的基因序列,设计用于检测猪群中流行较广的1或14型,2或1/2型、7型和9型猪链球菌的特异引物。对湖南部分规模猪场送检的疑似患链球菌病的猪的病料进行细菌的分离鉴定,用上述引物对分离的细菌进行PCR检测。结果显示,共分离到猪链球菌24株、马链球菌兽疫亚种1株、链球菌属其它种4株及其他菌属细菌7株。其中猪链球菌2型9株、9型4株和其它血清型猪链球菌11株。以上结果表明,不仅是多种血清型的猪链球菌、马链球菌兽疫亚种,还有多种链球菌及其他属细菌会引起猪链球菌病的发生。二是对... 

【文章来源】：湖南农业大学湖南省

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 猪链球菌病的研究概况
    1 病原学与分类
    2 流行病学
    3 毒力因子
    4 综合防治
第二章 湖南部分规模猪场链球菌的分离鉴定与流行病学调查
    1 材料与方法
        1.1 病料样本
        1.2 主要试剂
        1.3 细菌分离培养
        1.4 引物设计与合成
        1.5 疑似链球菌的PCR鉴定
        1.6 链球菌的的种属及血清型鉴定
        1.7 序列分析
    2 结果与分析
        2.1 链球菌的分离鉴定结果
        2.2 PCP扩增与凝胶电泳结果
        2.3 猪链球菌分型检测结果
    3 讨论
    4 小结
第三章 马链球菌兽疫亚种znuA等蛋白基因的克隆、表达与免疫原性分析
    1 材料与方法
        1.1 质粒与菌株
        1.2 主要耗材与试剂
        1.3 引物的设计与合成
        1.4 PCR扩增
        1.5 pET28载体克隆与基因测序
        1.6 重组表达载体的构建及鉴定
        1.7 重组表达菌诱导表达及SDS-PAGE鉴定
        1.8 目的蛋白纯化
        1.9 重组蛋白Western Blot分析
    2 结果与分析
        2.1 基因的选择和生物信息预测
        2.2 PCR扩增
        2.3 重组表达菌诱导表达及SDS-PAGE鉴定
        2.4 目的蛋白纯化
        2.5 重组蛋白的Western-blot分析结果
    3 讨论
    4 小结
第四章 马链球菌兽疫亚种6种蛋白对小鼠免疫保护的评价
    1 材料与方法
        1.1 实验动物
        1.2 主要试剂与耗材
        1.3 细菌浓度的测定和活菌计数
        1.4 小鼠半数致死浓度的测定
        1.5 疫苗的配制
        1.6 小鼠免疫试验一
        1.7 小鼠免疫试验二
        1.8 免疫组的SEZ攻毒试验
    2 结果与分析
        2.1 细菌浓度的测定和活菌计数
        2.2 小鼠半数致死浓度的测定
        2.3 临床观察与病原菌的分离鉴定
        2.4 免疫组的攻毒试验结果
        2.5 混合蛋白免疫组的攻毒试验结果
    3 讨论
    4 小结
结论
参考文献
附录
符号说明
致谢
个人简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]河池市屠宰猪群中猪链球菌2型的流行病学调查[J]. 谢婷,韦瑛,廖安翠,姚伟.  中国动物检疫. 2012(12)
[2]2型猪链球菌锌转运蛋白A对小鼠免疫保护作用[J]. 李先富,潘秀珍,韩明月,刘文静,王长军,唐家琪.  中国公共卫生. 2012(01)
[3]2006-2007年柳州市猪屠宰场猪链球菌流行情况调查[J]. 黄小武,黄溢泓,韦正吉,梁兆斌.  养殖与饲料. 2010(10)
[4]猪链球菌2型毒力相关因子的研究进展[J]. 郭莉莉,徐成刚,张建民,李静怡,陈济铛,廖明.  中国畜牧兽医. 2010(01)
[5]表观健康猪群携带猪链球菌情况流行病学调查[J]. 杨珍,王楷宬,范伟兴,姜平.  中国人兽共患病学报. 2009(10)
[6]辽西地区猪链球菌病的流行病学调查及防治研究[J]. 史丽华,张立志,包敏.  黑龙江畜牧兽医. 2007(10)
[7]冀东地区猪链球菌病流行病学调查[J]. 马增军,李东红,芮萍,吴建华,张建文,杨宗泽,史秋梅.  河北农业大学学报. 2006(04)
[8]四川省猪链球菌病的流行病学调查[J]. 王泽洲,余勇,程江,谢智明,马孟根,李金海,陈斌,李春.  中国兽医科学. 2006(06)
[9]广西猪源链球菌分离株的分群鉴定[J]. 陈泽祥,吴礼结,许力干,潘燕,朱贤龙.  中国畜牧兽医. 2005(12)
[10]猪链球菌病与猪链球菌2型[J]. 陆承平.  科技导报. 2005(09)

硕士论文
[1]SLY蛋白与2型猪链球菌感染[D]. 贺政新.中国人民解放军军事医学科学院 2009
[2]中国部分地区猪链球菌遗传背景及进化关系研究[D]. 蔡振鸿.南京农业大学 2007



本文编号：3280023