PRRSV强毒株HuN4与疫苗毒株HuN4-F112入胞途径差异的研究
发布时间：2021-07-18 17:36
猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus,PRRSV）引起的猪场最重要传染病之一,给全世界养猪业造成了持续的经济损害。减毒活疫苗免疫接种作为防控PRRS的有效手段在全世界范围内得到广泛应用。减毒活疫苗毒株是在猴源细胞系上连续传代获得的,导致其与亲本毒株在生物学特性上存在巨大差异,同时本实验室前期结果也提示HP-PRRSV野毒株和疫苗毒株在入胞途径上可能存在差异。本研究以HP-PRRSV野毒株HuN4株和疫苗毒株HuN4-F112株为研究对象,以病毒入胞的主要途径为切入点,对两种病毒感染Marc-145和PAM细胞时的入胞途径差异进行研究,以期为进一步揭示病毒致弱机制奠定基础。现将结果总结如下:1.PRRSV强弱毒均借助网格蛋白介导的内吞途径感染宿主细胞本实验利用网格蛋白介导的内吞途径特异性抑制剂CPZ预处理PAM和Marc-145细胞,发现CPZ处理不影响PRRSV强弱毒在PA...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PRRSV基因组结构示意图(MUSICandGAGNON,2010)
中国农业科学院硕士学位论文第一章绪论5膜完成出芽过程，继而通过胞外途径使新的病毒粒子从细胞中释放（图1.2）。图1.2PRRSV的复制周期(LUNNEYetal.,2016)Fig.1.2ThelifecycleofPRRSV(LUNNEYetal.,2016)随着PRRSV的感染后，宿主在免疫学、病毒学和其临床症状方面呈现不同的特征，大概可分为三个阶段(图1.3)。第一个阶段宿主表现急性感染症状，PRRSV首选肺脏感染，入侵巨噬细胞、树突状细胞、肺和上呼吸道，复制6~12小时便能够导致宿主病毒血症。此时宿主虽然激活免疫调节产生抗体，但病毒血症仍可在宿主体内存在较长一段时间；第二阶段主要为持续感染阶段，与第一阶段相比，PRRSV在宿主体内的复制能力减弱，宿主血液和肺组织中的病毒含量下降，很难检测到病毒，临床症状也不明显，在这个阶段，病毒主要在淋巴器官中复制，包括扁桃体和淋巴结，而不是脾脏(ALLENDEetal.,2000;MENGELINGetal.,1995;ROWLANDetal.,2003)，病毒在淋巴结中持续复制，使PRRSV可通过猪只的口腔分泌物、排泄物及精液传递给未感染猪只(CHRISTOPHER-HENNINGSetal.,2008)；随后，病毒的复制越来越弱直至复制终止，病毒在体内完全检测不到。当宿主体完全检测不到病毒时，即为第三阶段。目前的研究并未揭露病毒在宿主体内完全消失的时间，但有研究表明病毒可以在宿主体内保持复制状态长达250天(WILLSetal.,2003)。因此我们得出结论，当宿主感染PRRSV后，其复制并没有建立一个稳态平衡，而是先呈指数增加，继而随着时间的延长逐渐下降，直至消失。在病毒在宿主体内完全消失之前，淋巴器官作为病毒的最后复制场所已被证明(ALLENDEetal.,2000)。
中国农业科学院硕士学位论文第一章绪论6图1.3猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的免疫应答(LUNNEYetal.,2016)Fig.1.3ImmuneresponsetoPRRSVinfection(LUNNEYetal.,2016)1.3PRRSV受体的研究进展虽然PRRSV具有严格的细胞嗜性，但通过转染将某些特异性受体或者将病毒基因组RNA导入非易感细胞后，PRRSV同样可以入侵非允许的细胞系并产生复制。这表明，PRRSV的这种细胞嗜性可能是由于感染细胞中是否存在介导病毒入侵的受体决定的(KREUTZetal.,1998;MEULENBERGetal.,1998)。不同的细胞因子介导PRRSV入胞的机制已被确定，硫酸乙酰肝素、唾液酸粘附素、CD163被证明在病毒结合时促进病毒感染(CALVERTetal.,2007;DELPUTTEetal.,2002;DUANetal.,1998b;VANDERHEIJDENetal.,2001;VANDERHEIJDENetal.,2003)，然而，对于其他进入受体的作用模式以及可能与PRRSV病毒粒子的相互作用机理仍尚未阐明(MISINZOetal.,2008)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国猪繁殖与呼吸综合征病毒流行历史及现状[J]. 郭振华,陈鑫鑫,李睿,乔松林,郭军庆,张改平. 畜牧兽医学报. 2018(01)
[2]猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 刘欢,姜一峰,张文超,杨莘,周艳君,黄勤锋,童光志. 中国动物传染病学报. 2017(02)
[3]猪CD151转基因PK-15细胞系构建及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒的易感性[J]. 黄燕燕,郭睿,张钰,张鑫宇,夏晓莉,孙怀昌. 微生物学报. 2013(05)
[4]波形蛋白介导猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞作用的初步研究[J]. 王伟伟,张璐,马晓春,高继明,肖一红,周恩民. 病毒学报. 2011(05)
[5]我国高致病性猪蓝耳病病毒的演化分析[J]. 安同庆,田志军,李冉,彭金美,周艳君,华育平,刘娣,童光志. 中国兽医杂志. 2011(04)
[6]病毒入胞机制研究方法及其研究进展[J]. 孙芳,李玉霞,凌焱,梁龙,陈珊,陈惠鹏. 微生物学通报. 2010(01)
[7]猪繁殖与呼吸综合征病毒Taq Man-MGB荧光定量RT-PCR方法的建立和应用[J]. 韦天超,田志军,安同庆,周艳君,肖燕,姜一峰,郝晓芳,张善瑞,彭金美,仇华吉,童光志. 中国预防兽医学报. 2008(12)
[8]受体介导式入胞的分子机理（1）[J]. 杜长征,张志文. 生物学通报. 2004(11)
[9]从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J]. 郭宝清,陈章水,刘文兴,崔益洙. 中国畜禽传染病. 1996(02)
硕士论文
[1]猪繁殖与呼吸综合征病毒感染情况调查与流行毒株重组演化分析[D]. 刘艳艳.山东大学 2018
[2]传染性支气管炎病毒结合脂筏并通过网格蛋白依赖型内吞入胞[D]. 王欢.中国农业科学院 2018
[3]PRRSV强弱毒感染PAM细胞的差异膜蛋白分析及其作用机制的研究[D]. 张玉娇.中国农业科学院 2018
本文编号：3290044
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PRRSV基因组结构示意图(MUSICandGAGNON,2010)
中国农业科学院硕士学位论文第一章绪论5膜完成出芽过程，继而通过胞外途径使新的病毒粒子从细胞中释放（图1.2）。图1.2PRRSV的复制周期(LUNNEYetal.,2016)Fig.1.2ThelifecycleofPRRSV(LUNNEYetal.,2016)随着PRRSV的感染后，宿主在免疫学、病毒学和其临床症状方面呈现不同的特征，大概可分为三个阶段(图1.3)。第一个阶段宿主表现急性感染症状，PRRSV首选肺脏感染，入侵巨噬细胞、树突状细胞、肺和上呼吸道，复制6~12小时便能够导致宿主病毒血症。此时宿主虽然激活免疫调节产生抗体，但病毒血症仍可在宿主体内存在较长一段时间；第二阶段主要为持续感染阶段，与第一阶段相比，PRRSV在宿主体内的复制能力减弱，宿主血液和肺组织中的病毒含量下降，很难检测到病毒，临床症状也不明显，在这个阶段，病毒主要在淋巴器官中复制，包括扁桃体和淋巴结，而不是脾脏(ALLENDEetal.,2000;MENGELINGetal.,1995;ROWLANDetal.,2003)，病毒在淋巴结中持续复制，使PRRSV可通过猪只的口腔分泌物、排泄物及精液传递给未感染猪只(CHRISTOPHER-HENNINGSetal.,2008)；随后，病毒的复制越来越弱直至复制终止，病毒在体内完全检测不到。当宿主体完全检测不到病毒时，即为第三阶段。目前的研究并未揭露病毒在宿主体内完全消失的时间，但有研究表明病毒可以在宿主体内保持复制状态长达250天(WILLSetal.,2003)。因此我们得出结论，当宿主感染PRRSV后，其复制并没有建立一个稳态平衡，而是先呈指数增加，继而随着时间的延长逐渐下降，直至消失。在病毒在宿主体内完全消失之前，淋巴器官作为病毒的最后复制场所已被证明(ALLENDEetal.,2000)。
中国农业科学院硕士学位论文第一章绪论6图1.3猪繁殖与呼吸综合征病毒感染的免疫应答(LUNNEYetal.,2016)Fig.1.3ImmuneresponsetoPRRSVinfection(LUNNEYetal.,2016)1.3PRRSV受体的研究进展虽然PRRSV具有严格的细胞嗜性，但通过转染将某些特异性受体或者将病毒基因组RNA导入非易感细胞后，PRRSV同样可以入侵非允许的细胞系并产生复制。这表明，PRRSV的这种细胞嗜性可能是由于感染细胞中是否存在介导病毒入侵的受体决定的(KREUTZetal.,1998;MEULENBERGetal.,1998)。不同的细胞因子介导PRRSV入胞的机制已被确定，硫酸乙酰肝素、唾液酸粘附素、CD163被证明在病毒结合时促进病毒感染(CALVERTetal.,2007;DELPUTTEetal.,2002;DUANetal.,1998b;VANDERHEIJDENetal.,2001;VANDERHEIJDENetal.,2003)，然而，对于其他进入受体的作用模式以及可能与PRRSV病毒粒子的相互作用机理仍尚未阐明(MISINZOetal.,2008)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]中国猪繁殖与呼吸综合征病毒流行历史及现状[J]. 郭振华,陈鑫鑫,李睿,乔松林,郭军庆,张改平. 畜牧兽医学报. 2018(01)
[2]猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 刘欢,姜一峰,张文超,杨莘,周艳君,黄勤锋,童光志. 中国动物传染病学报. 2017(02)
[3]猪CD151转基因PK-15细胞系构建及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒的易感性[J]. 黄燕燕,郭睿,张钰,张鑫宇,夏晓莉,孙怀昌. 微生物学报. 2013(05)
[4]波形蛋白介导猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞作用的初步研究[J]. 王伟伟,张璐,马晓春,高继明,肖一红,周恩民. 病毒学报. 2011(05)
[5]我国高致病性猪蓝耳病病毒的演化分析[J]. 安同庆,田志军,李冉,彭金美,周艳君,华育平,刘娣,童光志. 中国兽医杂志. 2011(04)
[6]病毒入胞机制研究方法及其研究进展[J]. 孙芳,李玉霞,凌焱,梁龙,陈珊,陈惠鹏. 微生物学通报. 2010(01)
[7]猪繁殖与呼吸综合征病毒Taq Man-MGB荧光定量RT-PCR方法的建立和应用[J]. 韦天超,田志军,安同庆,周艳君,肖燕,姜一峰,郝晓芳,张善瑞,彭金美,仇华吉,童光志. 中国预防兽医学报. 2008(12)
[8]受体介导式入胞的分子机理（1）[J]. 杜长征,张志文. 生物学通报. 2004(11)
[9]从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J]. 郭宝清,陈章水,刘文兴,崔益洙. 中国畜禽传染病. 1996(02)
硕士论文
[1]猪繁殖与呼吸综合征病毒感染情况调查与流行毒株重组演化分析[D]. 刘艳艳.山东大学 2018
[2]传染性支气管炎病毒结合脂筏并通过网格蛋白依赖型内吞入胞[D]. 王欢.中国农业科学院 2018
[3]PRRSV强弱毒感染PAM细胞的差异膜蛋白分析及其作用机制的研究[D]. 张玉娇.中国农业科学院 2018
本文编号：3290044
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