酵母双杂交筛选狂犬病病毒M蛋白相互作用的宿主蛋白
发布时间：2021-07-22 16:22
狂犬病是由狂犬病毒引起的一种急性人畜共患病，狂犬病毒（rabies virus，RV）属于弹状病毒科狂犬病毒属，是一种嗜神经病毒，感染后病死率接近100%，狂犬病毒基质蛋白是狂犬病毒的组成部分之一，主要功能是参与病毒的装配、出芽，诱导细胞凋亡，抑制宿主基因表达等，说明其在狂犬病毒感染循环过程中发挥着及其重要的作用，但是对该蛋白与宿主相互作用的分子机制还知之甚少。酵母双杂交系统（Yeast two-hybrid system）是研究蛋白相互作用和功能、筛选新蛋白的重要工具。为了研究狂犬病病毒基质蛋白与宿主相互作用的蛋白，我们首先通过PCR方法获得CVS11-M基因，然后构建酵母表达载体pGBKT7-CVS11-M，用醋酸锂法将构建好的pGBKT7-CVS11-M与人脑cDNA文库转入Y2HGold酵母感受态细胞中，通过营养缺陷培养筛选阳性克隆，对阳性克隆进行酶切鉴定、回转实验等进一步验证，借住BLAST工具对筛选出的阳性克隆测序结果进行同源性分析，最后确定四种相互作用的蛋白，包括Homo sapiens prolyl4-hydroxylase, alphapolypeptide II （...
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
第一篇 文献综述
第一章 酵母双杂交系统简介
1.1 酵母双杂交系统的基本原理
1.2 酵母双杂交系统的优缺点
1.3 酵母双杂交系统的发展及应用
第二章 狂犬病病毒 M 蛋白简介
2.1 M 蛋白概述
2.2 M 蛋白作用
第三章 宿主蛋白 HAX-1 研究进展
3.1 HAX-1 蛋白概述
3.2 HAX-1 蛋白与疾病的关系
第二篇 研究内容
第一章 酵母双杂交筛选与狂犬病病毒 M 蛋白相互作用的蛋白
1.1 实验试剂
1.2 实验仪器
1.3 实验方法
1.4 实验结果
1.5 讨论
1.6 小结
第二章 GST 沉淀（pull-down）实验验证 M 蛋白与 HAX-1 蛋白的体外相互作用
2.1 材料
2.2 实验方法
2.3 实验结果
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 免疫共沉淀验证 M 蛋白与 HAX-1 蛋白的体内相互作用
3.1 实验材料
3.2 实验方法
3.3 实验结果
3.4 讨论
3.5 小结
结论
参考文献
作者简介
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于内部核糖体进入位点提高重组NDV表达IBDV VP2基因的研究[J]. 何金娇,刘雪莹,吴云舟,郭茉,韩晓辉,尹杰超,安莹,任桂萍,李德山. 中国预防兽医学报. 2013(06)
[2]狂犬病病毒BD-06株基质蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备[J]. 赵雪超,张学炜,张守峰,刘晔,米立娟,扈荣良. 中国畜牧兽医. 2013(04)
[3]狂犬病病毒基质蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立[J]. 宫苗苗,曾妮,程朝飞,李刚. 中国人兽共患病学报. 2013(01)
[4]基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法比较研究[J]. 程朝飞,宫苗苗,田康乐,王勇,赵占中,史利军,李刚. 畜牧兽医学报. 2012(12)
[5]低pH胃蛋白酶-甲苯消化法灭活破伤风免疫血浆中脂包膜病毒效果验证[J]. 王剑锋,英志芳,李长贵. 中国生物制品学杂志. 2012(09)
[6]利用生物信息学解码小鼠抗凋亡基因Hax-1及其蛋白的结构与特性[J]. 吴璇,邹海蛟,李硕,周江,李子博,李玉飞. 内蒙古中医药. 2010(24)
[7]短发夹状RNA靶向抑制HaCaT细胞Hax-1基因的表达研究[J]. 翟志芳,王莉,钟华,钟白玉,郝飞. 重庆医学. 2010(23)
[8]狂犬病病原学及其诊断方法研究进展[J]. 吴寿军,李小军,万世平,朱叠华,黄润标. 广东农业科学. 2010(07)
[9]利用噬菌体展示技术研究功能基因组和蛋白质-蛋白质相互作用——与酵母双杂交方法比较[J]. 张佳娣,石屹峰. 中国医药生物技术. 2010(03)
[10]狂犬病毒HEP-Flury株基质蛋白的原核表达及纯化[J]. 江飙,郑佳琳,邝贞结,梁红茹,徐蕙,郭霄峰. 中国预防兽医学报. 2010(05)
硕士论文
[1]盘基网柄菌多细胞发育期间与gp150蛋白相互作用蛋白的研究[D]. 王大磊.华东师范大学 2010
[2]NLS-RARα相互作用蛋白的筛选与验证[D]. 王东生.重庆医科大学 2008
[3]应用SELDI-TOF质谱技术筛选直肠癌病人血清中特异性生物标志物[D]. 韦涌涛.青岛大学 2007
[4]酵母双杂交技术筛选与p53蛋白相互作用的蛋白质研究[D]. 苏桂英.安徽农业大学 2006
本文编号：3297483
【文章来源】：吉林农业大学吉林省
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
目录
第一篇 文献综述
第一章 酵母双杂交系统简介
1.1 酵母双杂交系统的基本原理
1.2 酵母双杂交系统的优缺点
1.3 酵母双杂交系统的发展及应用
第二章 狂犬病病毒 M 蛋白简介
2.1 M 蛋白概述
2.2 M 蛋白作用
第三章 宿主蛋白 HAX-1 研究进展
3.1 HAX-1 蛋白概述
3.2 HAX-1 蛋白与疾病的关系
第二篇 研究内容
第一章 酵母双杂交筛选与狂犬病病毒 M 蛋白相互作用的蛋白
1.1 实验试剂
1.2 实验仪器
1.3 实验方法
1.4 实验结果
1.5 讨论
1.6 小结
第二章 GST 沉淀（pull-down）实验验证 M 蛋白与 HAX-1 蛋白的体外相互作用
2.1 材料
2.2 实验方法
2.3 实验结果
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 免疫共沉淀验证 M 蛋白与 HAX-1 蛋白的体内相互作用
3.1 实验材料
3.2 实验方法
3.3 实验结果
3.4 讨论
3.5 小结
结论
参考文献
作者简介
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于内部核糖体进入位点提高重组NDV表达IBDV VP2基因的研究[J]. 何金娇,刘雪莹,吴云舟,郭茉,韩晓辉,尹杰超,安莹,任桂萍,李德山. 中国预防兽医学报. 2013(06)
[2]狂犬病病毒BD-06株基质蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备[J]. 赵雪超,张学炜,张守峰,刘晔,米立娟,扈荣良. 中国畜牧兽医. 2013(04)
[3]狂犬病病毒基质蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立[J]. 宫苗苗,曾妮,程朝飞,李刚. 中国人兽共患病学报. 2013(01)
[4]基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法比较研究[J]. 程朝飞,宫苗苗,田康乐,王勇,赵占中,史利军,李刚. 畜牧兽医学报. 2012(12)
[5]低pH胃蛋白酶-甲苯消化法灭活破伤风免疫血浆中脂包膜病毒效果验证[J]. 王剑锋,英志芳,李长贵. 中国生物制品学杂志. 2012(09)
[6]利用生物信息学解码小鼠抗凋亡基因Hax-1及其蛋白的结构与特性[J]. 吴璇,邹海蛟,李硕,周江,李子博,李玉飞. 内蒙古中医药. 2010(24)
[7]短发夹状RNA靶向抑制HaCaT细胞Hax-1基因的表达研究[J]. 翟志芳,王莉,钟华,钟白玉,郝飞. 重庆医学. 2010(23)
[8]狂犬病病原学及其诊断方法研究进展[J]. 吴寿军,李小军,万世平,朱叠华,黄润标. 广东农业科学. 2010(07)
[9]利用噬菌体展示技术研究功能基因组和蛋白质-蛋白质相互作用——与酵母双杂交方法比较[J]. 张佳娣,石屹峰. 中国医药生物技术. 2010(03)
[10]狂犬病毒HEP-Flury株基质蛋白的原核表达及纯化[J]. 江飙,郑佳琳,邝贞结,梁红茹,徐蕙,郭霄峰. 中国预防兽医学报. 2010(05)
硕士论文
[1]盘基网柄菌多细胞发育期间与gp150蛋白相互作用蛋白的研究[D]. 王大磊.华东师范大学 2010
[2]NLS-RARα相互作用蛋白的筛选与验证[D]. 王东生.重庆医科大学 2008
[3]应用SELDI-TOF质谱技术筛选直肠癌病人血清中特异性生物标志物[D]. 韦涌涛.青岛大学 2007
[4]酵母双杂交技术筛选与p53蛋白相互作用的蛋白质研究[D]. 苏桂英.安徽农业大学 2006
本文编号：3297483
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