鸡DMRT1基因CRISPR/Cas9载体构建及打靶效率的检测

发布时间：2021-07-22 17:27

　　DMRT1（Double sex and Mab-3 related transcription factor 1）是鸡性腺分化和发育的关键候选基因,其详细的功能和作用途径还未被阐明。为了解明DMRT1在鸡性腺分化和发育过程中的功能,研究首次利用在线sg RNA平台设计4条鸡DMRT1 sg RNA序列,构建了4个sg RNA表达载体:Guide-1、Guide-2、Guide-3和Guide-4。转染鸡DF-1成纤维细胞后,利用T7E1内切酶的方法检测4个表达载体的打靶效率。结果显示,成功构建了4条正确的鸡DMRT1 sg RNA表达载体,并且都能高效地在DF-1细胞中表达,其中Guide-4表达载体能有效地打靶DMRT1基因,打靶效率为24.82%。研究结果为进一步在鸡胚敲除DMRT1基因,研究其功能奠定了基础。 

【文章来源】：中国家禽. 2017,39(02)北大核心

【文章页数】：4 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 质粒、菌种和细胞株
        1.1.2 主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 sg RNA的设计和合成
        1.2.2 sg RNA表达载体的构建
        1.2.3 高纯去内毒素质粒的提取
        1.2.4 sg RNA表达载体打靶效率的检测
2 结果
    2.1 CRISPR/Cas9重组质粒的构建
    2.2 CRISPR/Cas9重组质粒的转染
    2.3 sg RNA打靶效率检测
3 讨论



本文编号：3297579