牦牛多杀性巴氏杆菌OmpH基因的原核表达及免疫效果评价

发布时间：2021-07-23 20:57

　　本文根据GenBank中巴氏杆菌外膜蛋白H（OmpH）基因核苷酸序列（登录号：HM582882）分别设计了含信号肽和去信号肽两对特异性引物，通过PCR方法扩增青海省牦牛源多杀性巴氏杆菌(（Pasteurella mutocida，Pm）分离株P0910的OmpH基因，分别得到含信号肽的OmpH片段（HM）和成熟外膜蛋白H的OmpH基因，再分别克隆到pMD19-T Simple载体上，然后进行序列测定和分析。结果表明，含信号肽的基因全长1005bp，包含一个完整的开放阅读框，编码334个氨基酸，前20个氨基酸为信号肽序列。成熟外膜蛋白含有一个945bp的开放阅读框，编码314个氨基酸。为了获得可溶性的蛋白，本实验进行了不同表达载体的选择。首先将成熟外膜蛋白H基因克隆到pET-32a载体和pCold I载体上，分别转入BL-21，经IPTG诱导表达后得到的重组蛋白几乎都以包涵体形式存在。然后将OmpH基因克隆到pMAL-c2x表达载体中，构建原核重组表达质粒pMAL-c2x-OmpH，转化大肠杆菌BL-21并进行诱导表达。SDS-PAGE结果表明：重组融合蛋白（MBP-OmpH）大小为76... 

【文章来源】：青海大学青海省 211工程院校

【文章页数】：93 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PCR扩增结果

增出 1000bp 左右的条带，-1）。M 1 2 3 4图 2-1 PCR 扩增结果Fig.2-1 PCR amplification r 1、2.PCR 扩增 OmpH 基因产Marker 1、2. The amplificatiohe amplification products of HM 1 2bpbpk

图 2-3 pMD19-T Simple 载体图谱及多克隆位点Fig.2-3 Vector map and clone sites of pMD19 - T SimpleOmpH

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3300026