基于鞭毛蛋白载体的口蹄疫表位疫苗研究
发布时间：2021-07-24 13:03
口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的一种急性、高度传染性和可快速远距离传播给猪、牛、羊等主要畜种及其他家养或野生的偶蹄类动物的动物疫病。鉴于疫苗接种策略在预防和控制口蹄疫中的关键作用,研制更安全、有效的口蹄疫疫苗已成为当务之急。基因工程表位疫苗具有良好的安全性且可诱导体液和细胞免疫应答,是一种潜在的候选疫苗。细菌的鞭毛蛋白是Toll样受体5（TLR5）识别的病原体相关分子模式（PAMP）,能够激活天然先天免疫和适应性免疫应答。越来越多的研究表明,将鞭毛蛋白作为递呈目的抗原到的载体可显著提高了抗原的免疫原性和保护效力。这提示人们开发基于鞭毛蛋白载体的重组蛋白疫苗是一种有前景的替代途径。本研究将口蹄疫病毒的两个关键B细胞表位的串联重复（2×B1B2）和一个截短的vp1（Δvp1）蛋白以不同的模式分别融合到带有一个通用型外源性T细胞表位的鞭毛蛋白的C-末端构建了三个重组鞭毛融合蛋白。其中,Δvp1和2×B1B2分别与鞭毛蛋白的C端融合而产生FT（FlagellinTruncated VP1）和FME（Flagellin-Multiple Epitopes）,Δvp1取代FME中鞭...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：95 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
基于鞭毛蛋白载体的口蹄疫表位疫苗研究的技术路线
图 1.2 细菌鞭毛蛋白参与的三个信号通路(引自 Cui,et al.,Expert Review of Vaccines, 2018)Figure 1.2 Three signaling pathways involved in bacterial flagellinA：巨噬细胞中细菌鞭毛蛋白刺激的 TLR5/TLR4 异源二聚体依赖性信号通路；图中左侧的蓝色的箭头描述的是巨噬细胞中细菌鞭毛蛋白通过 TLR4/TLR5 异源二聚体刺激产生 NO 合成的信号通路。TLR4/TLR5 复合物为通过 MyD88 非依赖性通路最终表达 IFN-β 提供必要的信号，该过程涉及到 TRIF 或 TIRAP/Mal的激活。TBK1 和 TRAF-6 随后的激活导致信号反应的级联放大作用，这使得 IFN-β 分别通过 IRF3 和 AP-1 两种途径诱导产生。细胞外 IFN-β 和膜受体的结合诱导 JAK 的活化。然后，stat-1 被 JAK 磷酸化。Stat 的激活最终诱导 iNOS的表达和 NO 的产生。B：胞外鞭毛蛋白诱导的 TLR5 依赖性 NF-κB 信号通路；图中中间红色箭头描述的是胞外鞭毛蛋白诱导的 TLR5 依赖性 NF-κ B 信号通路。细菌鞭毛蛋白与细胞表面受体 TLR5的结合诱导 TLR5 的二聚体化。然后，MyD88 被招募并与 TLR5 的胞质部分相结合，该过程导致随后的 IRAK4、 IRAK1、TRAF6、TAK1、 IKK 以及最终 Iκ B 激酶的激活。Iκ B 激酶的激活有助于 NF-κ B 的核定位，这将诱导许多下游炎症相关基因表达。这些激活基因分泌的各种炎症因子和趋化因子直接或间接参与随后的适应性的免疫反应。C：胞内鞭毛蛋白诱导的 NLRC4/NaIP5 依赖性炎性小体信号通路；图中右侧黑色箭头描述的是胞内鞭毛蛋白诱导的NLRC4/NAIP5 依赖性炎性小体信号通路。胞内鞭毛蛋白与NLRC4/NAIP5受体的相互作用导致异源寡聚和通过NLRC4的CARD或者在炎症复合物形成过程中与炎性小体结合的衔接蛋白ASC招募
意图如图2-1所示，鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白的三维结构位与鞭毛蛋白融合基因的重组体其构建策略如图 2-3 所表 2.1 构建重组融合蛋白的序列Table 2.1 Construction of recombinant fusion proteins表位/载体 注释VRGDLQVLAQK VP1(ASN133-PHE163) B1 表位; (G–H 环RHKQKIVAPAKQ VP1（ALA198-GLN211） B2 表位; (C-末端VRGDLQVLAQKAIKATRVTELLYPLLAVHPSAARHVP1(ASN133-GLN211) ΔVP1 epitope (截TEL 破伤风类毒素 CD4+T 细胞表位 P2 (TT-P2)通用型 T 细胞表TQNNLNK…LSLLR鞭毛蛋白 (ALA2-ARG506) 载体; 鼠伤寒沙GGGS Linker （连接子） (GGGGS)3;长的Linker （连接子） PG ; 短的柔性肽His tag pET24a(+) 载体
本文编号：3300701
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：95 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
基于鞭毛蛋白载体的口蹄疫表位疫苗研究的技术路线
图 1.2 细菌鞭毛蛋白参与的三个信号通路(引自 Cui,et al.,Expert Review of Vaccines, 2018)Figure 1.2 Three signaling pathways involved in bacterial flagellinA：巨噬细胞中细菌鞭毛蛋白刺激的 TLR5/TLR4 异源二聚体依赖性信号通路；图中左侧的蓝色的箭头描述的是巨噬细胞中细菌鞭毛蛋白通过 TLR4/TLR5 异源二聚体刺激产生 NO 合成的信号通路。TLR4/TLR5 复合物为通过 MyD88 非依赖性通路最终表达 IFN-β 提供必要的信号，该过程涉及到 TRIF 或 TIRAP/Mal的激活。TBK1 和 TRAF-6 随后的激活导致信号反应的级联放大作用，这使得 IFN-β 分别通过 IRF3 和 AP-1 两种途径诱导产生。细胞外 IFN-β 和膜受体的结合诱导 JAK 的活化。然后，stat-1 被 JAK 磷酸化。Stat 的激活最终诱导 iNOS的表达和 NO 的产生。B：胞外鞭毛蛋白诱导的 TLR5 依赖性 NF-κB 信号通路；图中中间红色箭头描述的是胞外鞭毛蛋白诱导的 TLR5 依赖性 NF-κ B 信号通路。细菌鞭毛蛋白与细胞表面受体 TLR5的结合诱导 TLR5 的二聚体化。然后，MyD88 被招募并与 TLR5 的胞质部分相结合，该过程导致随后的 IRAK4、 IRAK1、TRAF6、TAK1、 IKK 以及最终 Iκ B 激酶的激活。Iκ B 激酶的激活有助于 NF-κ B 的核定位，这将诱导许多下游炎症相关基因表达。这些激活基因分泌的各种炎症因子和趋化因子直接或间接参与随后的适应性的免疫反应。C：胞内鞭毛蛋白诱导的 NLRC4/NaIP5 依赖性炎性小体信号通路；图中右侧黑色箭头描述的是胞内鞭毛蛋白诱导的NLRC4/NAIP5 依赖性炎性小体信号通路。胞内鞭毛蛋白与NLRC4/NAIP5受体的相互作用导致异源寡聚和通过NLRC4的CARD或者在炎症复合物形成过程中与炎性小体结合的衔接蛋白ASC招募
意图如图2-1所示，鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白的三维结构位与鞭毛蛋白融合基因的重组体其构建策略如图 2-3 所表 2.1 构建重组融合蛋白的序列Table 2.1 Construction of recombinant fusion proteins表位/载体 注释VRGDLQVLAQK VP1(ASN133-PHE163) B1 表位; (G–H 环RHKQKIVAPAKQ VP1（ALA198-GLN211） B2 表位; (C-末端VRGDLQVLAQKAIKATRVTELLYPLLAVHPSAARHVP1(ASN133-GLN211) ΔVP1 epitope (截TEL 破伤风类毒素 CD4+T 细胞表位 P2 (TT-P2)通用型 T 细胞表TQNNLNK…LSLLR鞭毛蛋白 (ALA2-ARG506) 载体; 鼠伤寒沙GGGS Linker （连接子） (GGGGS)3;长的Linker （连接子） PG ; 短的柔性肽His tag pET24a(+) 载体
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