鸭群中禽白血病病毒的核酸检测
发布时间：2021-07-26 11:52
禽白血病是由禽白血病/肉瘤病毒群引起的以造血细胞增生为主的一类肿瘤性疾病。禽白血病病毒（Avian leukosis virus）属于反转录病毒科的a-反转录病毒属。根据其囊膜蛋白的不同，禽白血病在鸡的体内分为A、B、C、D、E、J六个亚群。其中，E亚群病毒为内源性禽白血病病毒，普遍存在于鸡群中，几乎没有致瘤性，对鸡群的影响较低。A、B、J亚群是鸡群中引发肿瘤的主要外源性ALV，C、D亚群的外源性ALV较为少见。其他的内源性ALV如F、G、H、I,存在于雉、鹌鹑、鹧鸪等鸟体内。鸡是禽白血病病毒的自然宿主，而目前为止，还没有关于鸭群中禽白血病的报道。为了解鸭群中禽白血病的流行情况，本研究采集了四川绵阳、江苏徐州、山东烟台、潍坊、聊城和滨州六个不同地区鸭群的鸭子组织样品共510份，通过PCR方法用p27抗原检测鸭子体内禽白血病病毒核酸的携带情况。根据核酸序列测定分析，结果表明：11%（58/510）的鸭子体内携带禽白血病病毒的核酸。另外设计引物对58份阳性样品进行完整的env基因扩增，结果其中2份扩增出完整的env基因，长度为1857bp，另有5份扩增出缺失808bp的env基因，长度为1...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PCR扩增P27基因Fig.3-1Detectionofp27byPCR
图 3-2 Env 基因 PCR 扩增结果Fig 3-2 PCR amplification of env geneM: DL2000 DNA Marker; 1-7：PCR products；8-9: negative controlv 基因的序列比对结7 只鸭的 env 基因 PCR 扩增产物进行测序，结果发现，这 7 只鸭的 PCenv 基因的目的片段。其中 2 份扩增出完整的 env 基因，大小为 1857b部分基因缺失的 env 基因片段，大小为 1049bp，中间有 808bp 的碱基
图 3-4 PCR 扩增四段基因的琼脂糖凝胶电泳Fig. 3-4 The PCR products of the four genesM: DL2000 DNA Marker; 1-2：The PCR product of a; 3-4 The PCR product of b;5-6 The PCR product of c; 7-8 The PCR product of d.2 四段基因重组质粒的 PCR 鉴定a、b、c、d 四段基因与 pET-32a（+）重组质粒分别命名为 gp85-a、gp85-b、gp885-d。这四个重组质粒分别用相应的引物扩增目的片段后进行测序。测序结果显的是正确序列的基因片段，与原始毒株同源性在 100%。.3 SDS-PAGE 凝胶分析ALV-B gp85 的四段基因的重组质粒转化至表达菌株中经 IPTG 诱导表达，10000心 1min 后收集菌体，加入适量的 PBS 重悬菌体后，再加入等体积的 2 倍 SDS 上液，混匀后沸水浴 10min，5000 rpm 离心 10min，取上清，以 12%的聚丙酰胺凝
【参考文献】：
期刊论文
[1]B亚群禽白血病病毒SDAU09C2株的TCID50与p27抗原之间的相关性研究[J]. 李薛,董宣,赵鹏,牛星,崔治中. 中国畜牧兽医. 2013(02)
[2]我国地方品种鸡分离到的一个禽白血病病毒新亚群的鉴定[J]. 王鑫,赵鹏,崔治中. 病毒学报. 2012(06)
[3]禽白血病p27抗原检测阳性与病毒分离的相关性比较[J]. 杨飞跃,吴艳,黄翌,张文华,梁银秀,陈福勇,曹红. 中国兽医杂志. 2012(05)
[4]芦花鸡中B亚群禽白血病病毒的分离与鉴定[J]. 赵冬敏,张青婵,崔治中. 病毒学报. 2010(01)
[5]地方品系鸡中一株A亚群鸡白血病病毒的分离和鉴定[J]. 朱美真,吴玉宝,崔治中. 中国动物传染病学报. 2009(04)
[6]蛋鸡J亚群白血病病毒的分离鉴定及序列分析[J]. 王辉,崔治中. 病毒学报. 2008(05)
[7]商品蛋鸡成髓细胞瘤、血管瘤型J亚群白血病病理学初报[J]. 成子强,刘思当,孟祥凯,张洪海,刁秀国,刘青,崔治中. 畜牧兽医学报. 2008(07)
[8]禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立和标化[J]. 陈晨,曹红,金英杰,雷霆,庞平,刘海霞,宋铁彬,陈福勇. 中国预防兽医学报. 2005(06)
[9]禽白血病和羽速基因对白壳蛋鸡生产性能的影响[J]. 宁中华,王忠,彭丹芳,侯卓成,徐桂云. 中国畜牧杂志. 2005(10)
[10]中国麻鸡中发现禽J亚群白血病[J]. 成子强,张利,刘思当,张玲娟,崔治中. 微生物学报. 2005(04)
本文编号：3303514
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PCR扩增P27基因Fig.3-1Detectionofp27byPCR
图 3-2 Env 基因 PCR 扩增结果Fig 3-2 PCR amplification of env geneM: DL2000 DNA Marker; 1-7：PCR products；8-9: negative controlv 基因的序列比对结7 只鸭的 env 基因 PCR 扩增产物进行测序，结果发现，这 7 只鸭的 PCenv 基因的目的片段。其中 2 份扩增出完整的 env 基因，大小为 1857b部分基因缺失的 env 基因片段，大小为 1049bp，中间有 808bp 的碱基
图 3-4 PCR 扩增四段基因的琼脂糖凝胶电泳Fig. 3-4 The PCR products of the four genesM: DL2000 DNA Marker; 1-2：The PCR product of a; 3-4 The PCR product of b;5-6 The PCR product of c; 7-8 The PCR product of d.2 四段基因重组质粒的 PCR 鉴定a、b、c、d 四段基因与 pET-32a（+）重组质粒分别命名为 gp85-a、gp85-b、gp885-d。这四个重组质粒分别用相应的引物扩增目的片段后进行测序。测序结果显的是正确序列的基因片段，与原始毒株同源性在 100%。.3 SDS-PAGE 凝胶分析ALV-B gp85 的四段基因的重组质粒转化至表达菌株中经 IPTG 诱导表达，10000心 1min 后收集菌体，加入适量的 PBS 重悬菌体后，再加入等体积的 2 倍 SDS 上液，混匀后沸水浴 10min，5000 rpm 离心 10min，取上清，以 12%的聚丙酰胺凝
【参考文献】：
期刊论文
[1]B亚群禽白血病病毒SDAU09C2株的TCID50与p27抗原之间的相关性研究[J]. 李薛,董宣,赵鹏,牛星,崔治中. 中国畜牧兽医. 2013(02)
[2]我国地方品种鸡分离到的一个禽白血病病毒新亚群的鉴定[J]. 王鑫,赵鹏,崔治中. 病毒学报. 2012(06)
[3]禽白血病p27抗原检测阳性与病毒分离的相关性比较[J]. 杨飞跃,吴艳,黄翌,张文华,梁银秀,陈福勇,曹红. 中国兽医杂志. 2012(05)
[4]芦花鸡中B亚群禽白血病病毒的分离与鉴定[J]. 赵冬敏,张青婵,崔治中. 病毒学报. 2010(01)
[5]地方品系鸡中一株A亚群鸡白血病病毒的分离和鉴定[J]. 朱美真,吴玉宝,崔治中. 中国动物传染病学报. 2009(04)
[6]蛋鸡J亚群白血病病毒的分离鉴定及序列分析[J]. 王辉,崔治中. 病毒学报. 2008(05)
[7]商品蛋鸡成髓细胞瘤、血管瘤型J亚群白血病病理学初报[J]. 成子强,刘思当,孟祥凯,张洪海,刁秀国,刘青,崔治中. 畜牧兽医学报. 2008(07)
[8]禽白血病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立和标化[J]. 陈晨,曹红,金英杰,雷霆,庞平,刘海霞,宋铁彬,陈福勇. 中国预防兽医学报. 2005(06)
[9]禽白血病和羽速基因对白壳蛋鸡生产性能的影响[J]. 宁中华,王忠,彭丹芳,侯卓成,徐桂云. 中国畜牧杂志. 2005(10)
[10]中国麻鸡中发现禽J亚群白血病[J]. 成子强,张利,刘思当,张玲娟,崔治中. 微生物学报. 2005(04)
本文编号：3303514
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