芦花鸡鸡胚源沙门氏菌的分离鉴定及其耐药与毒力相关基因分析
发布时间：2021-07-26 12:11
沙门氏菌是一种临床常见且具有多种血清型的食源性革兰氏阴性病原菌。感染沙门氏菌后的鸡可能会出现产蛋量减少、腹泻等一系列的症状。其中,被鸡白痢沙门氏菌感染的鸡通常会排出白色的糨糊状粪便,腹泻严重时,可导致死亡。肠炎沙门氏菌为人畜共患病原菌,可导致机体产生发热、呕吐、腹泻等症状。目前,鸡群中沙门氏菌病是我国养殖业健康发展面临的主要威胁之一。本实验室研究发现,鸡群被沙门氏菌感染时,死胚样品中沙门氏菌的检出率最高。为评估芦花鸡群中沙门氏菌的感染状态,本研究应用芦花鸡的18日龄未出壳死胚,完成了沙门氏菌的分离鉴定,并对其耐药性及毒力基因的携带情况进行了分析。本研究于2019年4月采集芦花鸡鸡群中90个18日龄的未出壳死胚,对鸡胚样品分别进行BPW、TTB增菌培养,采用三线法将细菌接种于XLT4培养基,通过菌落形态、聚合酶链反应（PCR）鉴定沙门氏菌;用沙门氏菌属诊断血清对分离菌株进行血清分型;通过多位点序列分型技术（Multilocus sequence typing,MLST）确定沙门氏菌基因序列型,了解分离菌株的特点以及菌株间的亲缘关系;采用PCR技术对分离菌株进行13种常见毒力基因的检测;采...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
菌株在XLT4培养基上的培养特性
芦花鸡鸡胚源沙门氏菌的分离鉴定及其耐药与毒力相关基因分析243试验结果3.1沙门氏菌的鉴定结果3.1.1沙门氏菌培养特性被检样品经TTB增菌液培养后划线接种于XLT4培养基上，在XLT4培养基上生长出两种形态不同的菌落，一种是白色或乳白色、半透明、边缘整齐、圆形的小菌落（如图1所示）；另一种是中间为黑色、边缘整齐、圆形的小菌落（如图2所示）。图1菌株在XLT4培养基上的培养特性图2菌株在XLT4培养基上的培养特性Fig1BacterialstrainintheXLT4mediumFig2BacterialstrainintheXLT4medium3.1.2沙门氏菌PCR鉴定结果沙门菌invA引物凝胶电泳成像结果如图3所示：特异性条带与目的条带（331bp）相符合。
山东农业大学硕士专业学位论文25图3沙门菌invA基因扩增结果Fig3PCRamplificationofinvAgene*泳道M为DL2000DNAMarker，泳道1为阴性对照，泳道2为伤寒沙门氏菌，泳道3为肠炎沙门氏菌，泳道4为白痢沙门氏菌，泳道5-12为疑似沙门氏菌阳性样本泳道LaneMisDL2000DNAmarker,Lane1isnegativecontrol,Lane2isSalmonellatyphimurium,Lane3isSalmonellaenteritis,Lane4isSalmonellaPullorum,Lane5-12issuspectedSalmonellapositivesampleLane沙门菌iPAJ引物凝胶电泳成像结果如图4所示：特异性条带与目的条带（741bp）相符合。图4沙门菌iPAJ基因扩增结果Fig4PCRamplificationofiPAJgene*泳道M为DL2000DNAMarker，泳道-为阴性对照，泳道18为鸡白痢沙门氏菌阳性对照泳道1-17为疑似鸡白痢沙门氏菌阳性样本泳道LaneMisDL2000DNAmarker,Lane-isnegativecontrol,Lane18ispositivecontrolofSalmonellaPullorum,Lane1-17issuspectedpositivesamplelaneofSalmonellaPullorum3.2沙门氏菌分离结果本研究从芦花鸡鸡场送检的90个18日龄未出壳的鸡死胚中分离到77株沙门菌，阳性率为85.6%（77/90）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]禽沙门氏菌鉴别培养基和PCR检测方法的建立[J]. 张富友,宋艳,徐煜琳,鞠孜敬,崔治中,孙淑红. 山东畜牧兽医. 2019(10)
[2]食品中的致病微生物沙门氏菌的商业化检测技术[J]. 贺丽丽. 食品安全导刊. 2019(22)
[3]泰安渿河中产ESBLs大肠杆菌耐药性及耐药基因的传递规律[J]. 衣首静,刘青霄,蒋智宇,孙淑红. 微生物学报. 2019(11)
[4]2015-2018年河北省廊坊市食源性沙门氏菌分子分型及耐药监测的研究[J]. 邱颖,王宇卓,张丽敏,王敏娣,陈忠建,赵琪,李红. 医学动物防制. 2019(03)
[5]沙门氏菌诱导鸡生殖道产生免疫反应的研究进展[J]. 胡庆花,马跃,单春兰,张美玲,孙播东,王凤娇,栾维民,杨树宝. 中国预防兽医学报. 2019(01)
[6]鸡白痢沙门氏菌直接-多重PCR检测体系的建立[J]. 程玲玲,严伟,侯若彤,帅培强,张彪,白林含. 四川大学学报(自然科学版). 2019(01)
[7]上海市奉贤区188株沙门菌分子分型研究[J]. 谢晓红,赵宏伟,陈洪友,王仁刚,陶力新,沈莉. 预防医学情报杂志. 2018(11)
[8]安徽地区鸡白痢血清流行病学调查[J]. 翟银建,刘雪梅,刘磊,沈学怀,张丹俊. 中国畜禽种业. 2018(07)
[9]雏鸡沙门氏菌病的防控技术[J]. 米琳华,伏国伟. 畜牧兽医科技信息. 2018(06)
[10]广州市售海产品中副溶血弧菌分离菌株的鉴定及其耐药性分析[J]. 刘欢,谢婷,何美珊,丁楠,钟青萍. 食品与发酵工业. 2018(11)
博士论文
[1]细菌整合子捕获与表达耐药性基因盒调控机制的研究[D]. 魏取好.复旦大学 2010
硕士论文
[1]鸡源致病性沙门氏菌毒力基因与致病性的相关性研究[D]. 张珍.广西大学 2017
[2]水稻条斑病菌内源质粒分析与穿梭质粒载体的构建[D]. 李康佳.广西大学 2017
[3]猪源大肠杆菌的分离鉴定、耐药性分析及联合药敏试验的研究[D]. 王昌健.山东农业大学 2016
[4]贵州省畜禽主要病原菌耐药性及耐药基因研究[D]. 马光强.贵州大学 2016
[5]禽沙门氏菌的分离鉴定、生物被膜测定及耐药性分析[D]. 付玉勤.扬州大学 2016
[6]河北省鸡沙门氏菌的分离鉴定及耐药性分析[D]. 刘新静.山东农业大学 2015
[7]肉鸡屠宰生产链沙门氏菌的污染情况、耐药性、耐药基因及PFGE分型研究[D]. 赖海梅.四川农业大学 2015
[8]广西鸡源致病性沙门氏菌流行优势菌株血清型及耐药性的研究[D]. 李凤梅.广西大学 2015
[9]鸡源沙门氏菌耐药性、致病性与毒力基因相关性分析[D]. 王德宁.东北农业大学 2014
[10]雏鸡感染鸡白痢沙门氏菌对肠道AvBD6和ChTLR15表达与调控的影响[D]. 王燕.安徽农业大学 2014
本文编号：3303541
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
菌株在XLT4培养基上的培养特性
芦花鸡鸡胚源沙门氏菌的分离鉴定及其耐药与毒力相关基因分析243试验结果3.1沙门氏菌的鉴定结果3.1.1沙门氏菌培养特性被检样品经TTB增菌液培养后划线接种于XLT4培养基上，在XLT4培养基上生长出两种形态不同的菌落，一种是白色或乳白色、半透明、边缘整齐、圆形的小菌落（如图1所示）；另一种是中间为黑色、边缘整齐、圆形的小菌落（如图2所示）。图1菌株在XLT4培养基上的培养特性图2菌株在XLT4培养基上的培养特性Fig1BacterialstrainintheXLT4mediumFig2BacterialstrainintheXLT4medium3.1.2沙门氏菌PCR鉴定结果沙门菌invA引物凝胶电泳成像结果如图3所示：特异性条带与目的条带（331bp）相符合。
山东农业大学硕士专业学位论文25图3沙门菌invA基因扩增结果Fig3PCRamplificationofinvAgene*泳道M为DL2000DNAMarker，泳道1为阴性对照，泳道2为伤寒沙门氏菌，泳道3为肠炎沙门氏菌，泳道4为白痢沙门氏菌，泳道5-12为疑似沙门氏菌阳性样本泳道LaneMisDL2000DNAmarker,Lane1isnegativecontrol,Lane2isSalmonellatyphimurium,Lane3isSalmonellaenteritis,Lane4isSalmonellaPullorum,Lane5-12issuspectedSalmonellapositivesampleLane沙门菌iPAJ引物凝胶电泳成像结果如图4所示：特异性条带与目的条带（741bp）相符合。图4沙门菌iPAJ基因扩增结果Fig4PCRamplificationofiPAJgene*泳道M为DL2000DNAMarker，泳道-为阴性对照，泳道18为鸡白痢沙门氏菌阳性对照泳道1-17为疑似鸡白痢沙门氏菌阳性样本泳道LaneMisDL2000DNAmarker,Lane-isnegativecontrol,Lane18ispositivecontrolofSalmonellaPullorum,Lane1-17issuspectedpositivesamplelaneofSalmonellaPullorum3.2沙门氏菌分离结果本研究从芦花鸡鸡场送检的90个18日龄未出壳的鸡死胚中分离到77株沙门菌，阳性率为85.6%（77/90）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]禽沙门氏菌鉴别培养基和PCR检测方法的建立[J]. 张富友,宋艳,徐煜琳,鞠孜敬,崔治中,孙淑红. 山东畜牧兽医. 2019(10)
[2]食品中的致病微生物沙门氏菌的商业化检测技术[J]. 贺丽丽. 食品安全导刊. 2019(22)
[3]泰安渿河中产ESBLs大肠杆菌耐药性及耐药基因的传递规律[J]. 衣首静,刘青霄,蒋智宇,孙淑红. 微生物学报. 2019(11)
[4]2015-2018年河北省廊坊市食源性沙门氏菌分子分型及耐药监测的研究[J]. 邱颖,王宇卓,张丽敏,王敏娣,陈忠建,赵琪,李红. 医学动物防制. 2019(03)
[5]沙门氏菌诱导鸡生殖道产生免疫反应的研究进展[J]. 胡庆花,马跃,单春兰,张美玲,孙播东,王凤娇,栾维民,杨树宝. 中国预防兽医学报. 2019(01)
[6]鸡白痢沙门氏菌直接-多重PCR检测体系的建立[J]. 程玲玲,严伟,侯若彤,帅培强,张彪,白林含. 四川大学学报(自然科学版). 2019(01)
[7]上海市奉贤区188株沙门菌分子分型研究[J]. 谢晓红,赵宏伟,陈洪友,王仁刚,陶力新,沈莉. 预防医学情报杂志. 2018(11)
[8]安徽地区鸡白痢血清流行病学调查[J]. 翟银建,刘雪梅,刘磊,沈学怀,张丹俊. 中国畜禽种业. 2018(07)
[9]雏鸡沙门氏菌病的防控技术[J]. 米琳华,伏国伟. 畜牧兽医科技信息. 2018(06)
[10]广州市售海产品中副溶血弧菌分离菌株的鉴定及其耐药性分析[J]. 刘欢,谢婷,何美珊,丁楠,钟青萍. 食品与发酵工业. 2018(11)
博士论文
[1]细菌整合子捕获与表达耐药性基因盒调控机制的研究[D]. 魏取好.复旦大学 2010
硕士论文
[1]鸡源致病性沙门氏菌毒力基因与致病性的相关性研究[D]. 张珍.广西大学 2017
[2]水稻条斑病菌内源质粒分析与穿梭质粒载体的构建[D]. 李康佳.广西大学 2017
[3]猪源大肠杆菌的分离鉴定、耐药性分析及联合药敏试验的研究[D]. 王昌健.山东农业大学 2016
[4]贵州省畜禽主要病原菌耐药性及耐药基因研究[D]. 马光强.贵州大学 2016
[5]禽沙门氏菌的分离鉴定、生物被膜测定及耐药性分析[D]. 付玉勤.扬州大学 2016
[6]河北省鸡沙门氏菌的分离鉴定及耐药性分析[D]. 刘新静.山东农业大学 2015
[7]肉鸡屠宰生产链沙门氏菌的污染情况、耐药性、耐药基因及PFGE分型研究[D]. 赖海梅.四川农业大学 2015
[8]广西鸡源致病性沙门氏菌流行优势菌株血清型及耐药性的研究[D]. 李凤梅.广西大学 2015
[9]鸡源沙门氏菌耐药性、致病性与毒力基因相关性分析[D]. 王德宁.东北农业大学 2014
[10]雏鸡感染鸡白痢沙门氏菌对肠道AvBD6和ChTLR15表达与调控的影响[D]. 王燕.安徽农业大学 2014
本文编号：3303541
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3303541.html
