减毒痘苗病毒天坛株的构建、致病性及免疫原性研究

发布时间：2021-07-27 02:09

　　痘苗病毒天坛株作为疫苗，在我国消灭天花的历史上居功至伟。近年来，痘苗病毒天坛株作为活病毒载体在预防艾滋病、狂犬病和流感等传染病方面取得了巨大成就。然而，颅内接种实验表明，痘苗病毒天坛株对小鼠的致死率较高，具有一定的神经毒性。临床接种痘苗病毒天坛株疫苗也可能导致少数接种者出现严重副作用，例如脑炎、结膜炎、心肌炎及全身性发痘等。因此，如何构建更加低毒、更加安全且高效的痘苗病毒天坛株疫苗或载体成为研究的热点。通过同源重组和Cre-LoxP技术，定点敲除痘苗病毒基因组中的复制非必需基因，是构建减毒疫苗或载体的有效方法。基因重组作为基因工程的重要技术之一，包括同源重组、位点特异性重组以及转座重组。同源重组技术，又叫基因打靶技术，是目前研究痘苗病毒基因功能、构建减毒型痘苗病毒疫苗和载体的主要方法。该技术通过构建含有左右重组臂、启动子和筛选标记基因的穿梭载体，使病毒基因组与外源DNA序列发生重组，进而定点修饰或缺失基因组上某一目的基因，构建缺失型痘苗病毒。进而，通过体外和体内实验对缺失型痘苗病毒的生长动力学、病毒粒子表型、细胞间传播能力、毒力、宿主范围和免疫原性等特性进行系统分析。在构建缺失型毒株的... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：190 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

1胞内成熟病毒和胞外包膜病毒超微结构和形态示意图

帮助 VACV 逃避宿主特异性抗体和补体的抗病毒作用。5 种不同形态病毒粒子在侵入和释放的机制截然不同。IMV 不依赖于 PH 值，图1.1.2 痘苗病毒侵染宿主细胞过程示意图Fig1.1.2 Schematic diagram of vaccinia virus infecting host cell.

进行病毒分离，并测定病毒滴度，发现病毒滴度下降。用缺失型毒株感染 3 d 后，小鼠脾脏、肝脏、脑组织和纵隔淋巴结中，NK 细胞活动明显增强，对照组没有变化。缺失型毒株感染后 7 d，小鼠脾脏、肝脏、脑组织和纵隔淋巴结中，针对痘苗病毒特异性的细胞毒性 T 淋巴细胞（cytotoxic T-lymphocyte, CTL）反应明显增强，小鼠肺洗液和肺细胞中 IFN-γ分泌水平明显上升。体内和体外实验均表明，感染 C12L 缺失型毒株后，IL-18 水平提高。因此，当痘苗病毒感染机体后，无论特异性或非特异性免疫反应，由 C12L 编码的 vIL-18bp 蛋白对 IL-18 具有抑制作用。从另一方面也能说明 IL-18 具有促进 T 细胞分泌 IFN-γ和增强细胞毒性的功能，在消灭入侵机体的病毒过程中具有重要作用。为了研究 VTT 的毒力基因，Dai 等[44]敲除了 VTT 基因组中编码 IL-18 结合蛋白的 C12L 基因，以及编码肿瘤坏死因子同系物的 A53R 基因。小鼠实验表明，敲除 C12L 基因的 VTT 株其颅内接种半数致死量降低 10 倍。敲除 A53R 基因后，VTT 的颅内接种致死量下降 64.6 倍。通过皮内感染家兔实验表明，仅敲除 C12L 基因后，基因缺失病毒表现出减毒特性。

【参考文献】：
期刊论文
[1]应用Cre/loxP系统构建含人PTEN基因的重组腺病毒载体[J]. 朱自满,孙念绪,张超,吴淼,刘伟,余佩武.  消化外科. 2005(02)
[2]适用于疫苗株筛选的痘苗病毒载体的构建[J]. 周小云,刘颖,饶力群,王芙,戴凯凡,段丹丽,邵一鸣.  病毒学报. 2004(04)



本文编号：3304849