IGFBPs在内蒙古白绒山羊皮肤毛囊中的表达及IGFBP-5在染色体中的定位

发布时间：2021-07-29 16:04

　　为了了解IGF-工基因及IGF结合蛋白在内蒙古绒山羊皮肤毛囊中的表达调控作用及IGFBP-5基因在染色体中的定位,通过实时荧光定量PCR、荧光原位杂交（FISH）技术等实验研究,得到以下结论：1验证了IGF-I基因在内蒙古白绒山羊皮肤毛囊中的表达模式,发现其表达与毛囊的周期性发育相一致：2明确了在毛囊发育兴盛期有两种IGF结合蛋白即IGFBP-3和IGFBP-5高表达,这与前人在人和小鼠的皮肤毛囊中的研究结果一致；3对IGFBP-3和IGFBP-5基因在皮肤毛囊发育的各个时期的表达情况进行了研究,发现IGFBP-3虽然在兴盛期的表达量高于IGFBP-5基因,但是其在调控毛囊发育周期中的规律性不如IGFBP-5明显。因此,本研究推断,在内蒙古白绒山羊的皮肤毛囊发育中IGFBP-5基因可能发挥重要的调控作用；4对IGFBP-5基因在内蒙古绒山羊的染色体上进行了定位,并对FISH实验条件进行了一些探索性研究。 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
插图和附表清单
1 引言
    1.1 绒山羊概述
    1.2 毛囊的发生与周期性变化
        1.2.1 绒山羊毛被特点
        1.2.2 毛囊的周期性发育变化
    1.3 胰岛素样生长因子系统
        1.3.1 胰岛素样生长因子(IGFs)的分子生物学特性
        1.3.2 IGF-I的生理功能
        1.3.3 胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBPs)
        1.3.4 胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP-5)在毛囊发育中的研究
    1.4 荧光原位杂交(fluorescence in situ hybrization,FISH)
        1.4.1 FISH的原理及方法
        1.4.2 FISH的研究及其应用
    1.5 本研究的目的与意义
        1.5.1 本研究拟解决的问题
        1.5.2 本研究的意义
2 试验一 IGFBPs在绒山羊皮肤中的表达量研究
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验样品
        2.1.2 主要试剂和仪器
        2.1.3 引物合成
    2.2 试验方法
        2.2.1 样品RNA的提取与cDNA第一链的合成
        2.2.2 IGF-I基因反转录PCR
        2.2.3 IGF-I基因实时定量PCR
        2.2.4 IGFBP 1-6基因实时定量PCR
        2.2.5 IGFBP-3基因和IGFBP-5基因在皮肤中一年12月份的表达变化
    2.3 结果分析
        2.3.1 总RNA提取检测结果
        2.3.2 IGF-I基因反转录PCR结果
        2.3.3 IGF-I基因实时定量PCR结果
        2.3.4 IGFBP1-6基因实时定量PCR结果
        2.3.5 IGFBP-3基因和IGFBP-5基因在皮肤中一年12月份的表达变化
    2.4 讨论
    2.5 小结
3 试验二 IGFBP-5基因的FISH定位
    3.1 染色体标本的制备
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 实验方法
    3.2 IGFBP-5基因探针制备
        3.2.1 实验材料
        3.2.2 实验方法
    3.3 IGFBP-5基因定位
        3.3.1 主要实验溶液及配制方法
        3.3.2 主要实验仪器
        3.3.3 实验方法
    3.4 实验结果与分析
        3.4.1 染色体标本制备结果
        3.4.2 阳性BAC菌体PCR鉴定
        3.4.3 克隆鉴定及测序
        3.4.4 BAC质粒提取检测结果
        3.4.5 IGFBP-5基因定位结果
        3.4.6 杂交信号的定位
    3.5 讨论
        3.5.1 细胞培养条件的摸索
        3.5.2 染色体标本制备过程中的注意事项
        3.5.3 质粒提取过程中的注意事项
        3.5.4 杂交过程的注意事项
    3.6 结论
4 全文结论
致谢
参考文献
附录
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]LALBA基因SNP与内蒙古白绒山羊经济性状的关联[J]. 蓝贤勇,陈宏,田智泉,刘少卿,张永斌,王昕,房兴堂.  遗传. 2008(02)
[2]光照和埋植褪黑激素对内蒙古绒山羊氮分配和生产性能影响的研究[J]. 王林枫,卢德勋,孙海洲,赵秀英,珊丹.  中国农业大学学报. 2006(01)
[3]放牧条件下绒山羊绒毛季节性生长变化规律的研究[J]. 牛一兵,贾志海,卢德勋,郭宝林,孔祥浩,王润莲.  动物营养学报. 2005(02)
[4]不同蛋白质水平的日粮对内蒙古白绒山羊消化代谢的影响[J]. 彭玉麟,贾志海,卢德勋,李玉荣,牛文艺,任晓萍,娜仁.  畜牧兽医学报. 2002(04)
[5]试论21世纪初叶中国养羊业的持续发展问题[J]. 赵有璋.  中国草食动物. 2001(S1)
[6]绒山羊绒毛生长调控机理研究进展[J]. 李金泉,尹俊,周欢敏.  中国草食动物. 2001(03)
[7]不同无机硫对内蒙古白绒山羊消化代谢的影响[J]. 彭玉麟,贾志海,卢德勋,李玉荣,牛文艺,娜仁,任晓萍.  中国农业大学学报. 2001(03)

博士论文
[1]绒山羊BAC文库的构建与鉴定以及绒毛生长发育相关基因的筛选[D]. 刘志红.内蒙古农业大学 2009
[2]北京油鸡细菌人工染色体文库的构建与肉质风味相关基因的研究[D]. 吴宏梅.中国农业科学院 2008
[3]内蒙古绒山羊育种方法的研究[D]. 李金泉.中国农业大学 2005

硕士论文
[1]内蒙古阿尔巴斯白绒山羊毛囊生长周期性变化与KAP6 cDNA的特征分析[D]. 张春兰.内蒙古农业大学 2003



本文编号：3309627