白蚁体内产纤维素酶细菌的分离鉴定及其相关基因的载体构建与原核表达
发布时间：2021-07-31 07:35
木质纤维素的主要成分有木质素（约占总质量18-35%）、纤维素（约占总质量20-50%）和半纤维素（约占总质量15-35%）,其中纤维素是由D-吡喃葡萄糖基通过β-1,4糖苷键连接而成的线性多聚糖,它是植物最重要的组成成分,约占植物总重量的20%-40%,是地球上最丰富的可再生聚合物,但是它在聚合物形式不能被动物机体直接利用。但白蚁体内存在大量可降解纤维素的微生物,能够高效利用富含木质纤维素的木材。。因此本研究从陕西省佛坪县采集白蚁样品,从白蚁体内筛选出产高活性纤维素酶的菌株,再克隆出其纤维素酶基因,并使该基因在大肠杆菌中表达,旨在为纤维素酶基因人工重组菌的构建提供理论技术与基础材料;之后通过构建乳酸杆菌表达载体,使纤维素酶基因在罗伊氏乳酸杆菌上表达并分泌,最后通过发酵试验检测重组菌株对粗饲料的降解效果。主要研究结果如下:1.采集得到的白蚁样品经过形态学和16s rRNA鉴定,最终确定其为黑胸散白蚁（Reticulitermes chinensis）。通过羧甲基纤维素钠培养基筛选以及刚果红染色的方法,从白蚁体内筛选出了4株高产纤维素酶的菌株,经鉴定其分别为枯草芽孢杆菌（Bacillus...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PCR产物T16S基因片段凝胶电泳照片，M:DL5000Marker
将 T16S 基因在 NCBI 网站进行 Blas线粒体基因的同源性为 99%（KM216388.1）。综比对可断定该白蚁为黑胸散白蚁（Reticuliterme定筛选培养基上经过三次筛选和纯化，最终根据菌可在固体筛选培养基上生长的菌落。之后再将 9 板，37 ℃培养 30 h 后出现了肉眼可见的白色菌 4 株菌周围有明显的水解圈，所以初步判断这四 27f、1490R 扩增出目的片段，经琼脂糖凝胶电 1500bp 左右的条带（如图 2-2）。对连接产物 pMD19-C4 分别进行测序，将测序结果在 NCBI 网断 C1、C2、C3、C4 菌株分别是阿氏肠杆菌（En杆菌（Bacillus thuringiensis strain）、解淀粉芽n）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis strain）。
性质测定测定试验方法同 2.2.4（2）。基因的扩增与测序F、BaGR 和 CbsF、CbsR 扩增出目的片段，和 Cbs 系列引物分别从 C4 菌株的基因组里右的条带（如图 3-1）。对连接产物 pet-BaG NCBI 网站进行 Blast 分析，结果表明 BaG 萄糖苷酶基因（ID:CP021903.1）的相似性为孢杆菌内切-β-1,4-葡聚糖酶基因（ID:CP021
本文编号：3313057
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：84 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
PCR产物T16S基因片段凝胶电泳照片，M:DL5000Marker
将 T16S 基因在 NCBI 网站进行 Blas线粒体基因的同源性为 99%（KM216388.1）。综比对可断定该白蚁为黑胸散白蚁（Reticuliterme定筛选培养基上经过三次筛选和纯化，最终根据菌可在固体筛选培养基上生长的菌落。之后再将 9 板，37 ℃培养 30 h 后出现了肉眼可见的白色菌 4 株菌周围有明显的水解圈，所以初步判断这四 27f、1490R 扩增出目的片段，经琼脂糖凝胶电 1500bp 左右的条带（如图 2-2）。对连接产物 pMD19-C4 分别进行测序，将测序结果在 NCBI 网断 C1、C2、C3、C4 菌株分别是阿氏肠杆菌（En杆菌（Bacillus thuringiensis strain）、解淀粉芽n）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis strain）。
性质测定测定试验方法同 2.2.4（2）。基因的扩增与测序F、BaGR 和 CbsF、CbsR 扩增出目的片段，和 Cbs 系列引物分别从 C4 菌株的基因组里右的条带（如图 3-1）。对连接产物 pet-BaG NCBI 网站进行 Blast 分析，结果表明 BaG 萄糖苷酶基因（ID:CP021903.1）的相似性为孢杆菌内切-β-1,4-葡聚糖酶基因（ID:CP021
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