单增李斯特菌InlB的原核表达与多克隆抗体制备

发布时间：2021-07-31 15:06

　　为了进一步研究单增李斯特菌分泌的细菌侵袭相关蛋白内化素B（InlB）的功能,试验通过原核表达载体pET-28a分别表达InlB的N36～321和C392～630,并通过Ni²⁺亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,纯化的蛋白免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体,通过Western-blot检测单增李斯特菌InlB的表达情况。结果表明:成功构建重组表达质粒及诱导表达重组蛋白,制备的针对InlB N端和C端的多克隆抗体均能特异性检测单增李斯特菌中的InlB,但不能通过免疫荧光检测该菌表面的InlB。说明本研究制备的多克隆抗体可进一步用于研究单增李斯特菌InlB的功能。 

【文章来源】：黑龙江畜牧兽医. 2020,(10)北大核心

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【部分图文】：

inlB片段的扩增结果

为了验证制备的多克隆抗体的特异性,试验通过Western-blot和免疫荧光检测InlB在单增李斯特菌中的表达情况。Western-blot结果表明,InlBN36～321的多克隆抗体和InlBC392～630的多克隆抗体均能在EGDe-prfAM7和菌体裂解液中检测到InlB的特异性条带,而inlB基因缺失株EGDe-prfAM7-ΔinlB中则无相应的条带,见图8,表明制备的两种多克隆抗体均可用于InlB的检测;但两种多克隆抗体均不能通过免疫荧光检测菌体表面的InlB。图5 BL21转化重组质粒的鉴定结果

BL21转化重组质粒的鉴定结果


本文编号：3313687