恶性疟原虫膜蛋白Pf332功能及细胞内转运机制分析

发布时间：2021-07-31 18:59

　　疟疾是由疟原虫引起的虫媒性传染病。近些年，由于疟原虫抗药性的产生和迅速扩散，给疟疾药物防治带来严重挑战。研制安全有效的疫苗是预防疟疾感染和控制疟疾流行的主要手段。根据疟原虫在人体内的生活史特征，目前疟疾疫苗的研究主要针对红细胞前期和红细胞内期。其中，红细胞内期疫苗能直接降低宿主的发病率和死亡率，所以对红细胞内期虫体蛋白质特性及其与红细胞膜骨架的作用机制的研究备受关注。寄生在红细胞内的恶性疟原虫合成多种蛋白质并分泌到红细胞的细胞质中，其中Pf332是恶性疟原虫基因组所编码的分子量最大的蛋白质，含有DBL、TM和WR三个功能区。该蛋白质被认为是介导虫体在红细胞内发育、扩增的重要功能成分。为进一步分析恶性疟原虫Pf332分子的功能及合成和转运机制，本研究构建了编码融合有GFP标签的Pf332功能区（包括DBL-GFP、TM-GFP、WR-GFP、TMWR-GFP和DBLTM-GFP）的重组质粒。将质粒分别转染到恶性疟原虫3D7虫株内，通过活体荧光实时监测DBL、TM、WR、TM-WR、DBL-TM不同功能区蛋白质在细胞内的表达和分布情况。同时，运用间接免疫荧光共定位方法观察蛋白质DBL-GF... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

输出蛋白复合物PTEX结构

只有 PfEMP1 蛋白质的功能已被确定[70,71]。其它的蛋白包括 Pf332，Surfin，Stevor，Rifin 等的功能均不十分清楚。PfEMP1 是在宿主的染虫红细胞内产生的，能够引起红细胞表面疣状突起（knob 结构），促使疟原虫产生毒性，能够有效逃避宿主清除机制，以及引起包括脑疟在内的宿主脏器功能受损。Pf332 分子是研究发现的恶性疟原虫基因组编码的分子量最大的蛋白质，在疟原虫发育晚期通过典型的高尔基体分泌途径转运到染虫红细胞膜表面。抗 Pf332 的抗体可以抑制体外培养的虫体生长[72]，通过影响红细胞的通透性[73]、可塑性及有关功能的改变来促进红细胞膜的裂解和裂殖子的释放[74]。

模板 DNA 110×PCR Buffer 2.5dNTP Mixture (10mM) 2forward primer 1reverse primer 1Ex Taq Polymerase（5U/μL） 0.25ddH2O 17.25总体积 25虫培养结果中吸取少量培养液，涂片，吉姆萨和吖啶橙染色后.1）。如图所示，培养 12 h 和 24 h 为早期滋养体时期虫体、48 h 为裂殖体时期虫体。

【参考文献】：
期刊论文
[1]疟疾的防控现状及进展[J]. 车河龙,林栋.  热带医学杂志. 2010(02)
[2]基因工程疫苗及发展前景[J]. 陈启军,尹继刚,胡哲,姜宁,肖月.  中国人兽共患病学报. 2007(09)
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本文编号：3314014