猪肌内脂肪沉积相关MIRNA的鉴定及其功能研究
发布时间：2021-08-04 15:12
当今,随着人们生活质量的提高,消费者对肉的需求已经从数量变为质量。人们更加关注猪肉的味道,多汁性和嫩度。肌内脂肪（IMF）也被称为大理石纹,是影响猪肉质量至关重要的因素。因此,在保证一定瘦肉率的前提下,适当的提高LMF的含量已经成为现如今的研究热点。IMF的含量主要取决于脂肪细胞的生长和发育,目前猪中关于IMF的研究还不是很多,并且猪的IMF含量只得到了有限的提高,对其在猪的骨骼肌中积累的具体机制仍是未知数。本实验室利用高通量测序的方法,筛选与肌内脂肪沉积相关的miRNAs和基因,以及SNP位点,并初步确定了miR-365-3p和PGk1、CXHXorf23的靶向关系,通过研究靶向PGk1、CXHXorf23的miR-365-3p及其在C2C12细胞诱导成脂变化中的表达情况,为探究miRNAs以及候选基因调控肌内脂肪在骨骼肌中的沉积的分子机理奠定基础。取得的主要结果有：（1）通过构建与猪肌内脂肪含量相关的数字基因表达谱（DGE）,利用生物信息学分析,筛选出来了与肌内脂肪含量相关的44个miRNAs和129个差异表达基因,其中通过Real-Time PCR技术验证了高、低肌内脂肪含量组差...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
1 前言
1.1 研究问题的由来
1.2 猪IMF的研究进展
1.2.1 IMF的生物学特性
1.2.2 猪IMF研究现状
1.2.3 与IMF相关候选基因的研究进展
1.2.4 与IMF相关通路研究进展
1.3 miRNAs是调节猪IMF的重要因素
1.3.1 miRNAs的概述
1.3.2 与IMF相关miRNAs的研究进展
1.4 miR-365-3p与候选靶基因PGK1和CXHXorf23的研究
1.4.1 miR-365-3p的研究现状
1.4.2 PGK1和CXHXorf23基因与IMF相关研究
1.5 本研究的目的和意义
2 材料和方法
2.1 材料
2.1.1 猪组织样品
2.1.2 菌株、细胞和载体
2.1.2.1 试验用菌株
2.1.2.2 试验用细胞系
2.1.2.3 试验用载体
2.1.3 主要试剂及设备
2.1.3.1 主要试剂
2.1.3.2 主要设备
2.1.4 主要试剂的配制
2.1.5 主要软件及数据库
2.2 方法
2.2.1 猪背最长肌组织肌内脂肪的测定
2.2.2 猪高、低IMF组DEM和DEG的筛选与鉴定
2.2.2.1 组织切片油红染色
2.2.2.2 猪背最长肌总RNA抽提及检测
2.2.2.3 RT-PCR
2.2.2.4 高、低IMF组差异miRNA和基因的筛选
2.2.3 猪IMF GWAS材料准备
2.2.4 定量引物设计及条件优化
2.2.5 实时荧光定量PCR(Q-PCR)
2.2.6 细胞培养及其成脂诱导过程
2.2.6.1 C2C12细胞的培养
2.2.6.2 C2C12细胞成脂诱导过程
2.2.7 细胞转染
2.2.8 双荧光素酶检测
2.3 引物序列
2.4 本实验的技术路线
3 结果
3.1 猪IMF性状的表型变异结果
3.1.1 猪IMF性状表型结果
3.1.2 组织冰冻切片油红O染色检测
3.2 猪IMF GWAS分析结果
3.3 高低肌内脂肪组DEM、DEG筛选奠定
3.3.1 样品的选择标准
3.3.2 DEM和DEG的筛选结果
3.3.3 DEM和DEG的鉴定结果
3.4 猪miR-365-3p的靶基因预测及其组织表达检测结果
3.4.1 猪miR-365-3p的靶基因预测
3.4.2 猪miR-365-3p、PGK1基因和CXHXorf23基因的组织表达谱
3.5 猪miR-365-3p和PGK1、CXHXorf23基因的靶向关系验证
3.5.1 双荧光素酶报告基因实验鉴定猪miR-365-3p分别与PGK1基因、CXHXorf23基因的靶向关系验证
3.5.2 C2C12细胞诱导成脂及脂肪形成相关Maker基因的检测
3.5.3 猪miR-365-3p在高低IMF组和C2C12细胞诱导成脂过程中的表达模式结果
3.5.4 PGK1、CXHXorf23基因在高低IMF组和C2C12细胞诱导成脂过程中的表达模式结果
3.5.5 超表达miR-365-3p对不同脂肪相关Maker基因和靶基因的影响
4 讨论
4.1 miR-365-3p在高低IMF组和C2C12细胞诱导成脂过程表达模式
4.2 与肌内脂肪沉积相关miRNAs和基因的筛选
4.3 PGK1和CXHXorf23基因在不同组织中的表达
4.4 miR-365-3p对C2C12成脂诱导分化的作用
4.5 关于miR-365-3p靶向作用PGK1和CXHXorf23基因的应用
5 小结
5.1 本研究得到的结果
5.2 本研究的创新点
5.3 本研究的不足及下一步工作意见
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪PID1基因CDS区的克隆及其mRNA表达与肌内脂肪沉积关系[J]. 钱源,曾勇庆,杜金芳,崔景香,李华,陈其美,宋一萍,陈伟. 遗传. 2010(11)
[2]猪肌内脂肪的研究进展[J]. 谭林,姜海龙. 畜牧与饲料科学. 2010(09)
[3]牛肌内脂肪的研究进展[J]. 董丹萍,马俪珍. 农产品加工. 2010(08)
[4]日粮能量蛋白质水平对荣昌烤乳猪品系生长性能和肉质性状的影响[J]. 陈德志,余冰,陈代文. 动物营养学报. 2009(05)
[5]日粮能量水平对生长育肥猪肌内脂肪含量以及脂肪酸合成酶和激素敏感脂酶mRNA表达的影响[J]. 刘作华,杨飞云,孔路军,周晓容,辜玉红,王孝友. 畜牧兽医学报. 2007(09)
[6]猪肌内脂肪酸的研究进展[J]. 李庆岗,经荣斌. 饲料博览. 2004(03)
[7]肌肉内脂肪的研究进展[J]. 侯生珍. 甘肃畜牧兽医. 2000(03)
本文编号：3321926
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
1 前言
1.1 研究问题的由来
1.2 猪IMF的研究进展
1.2.1 IMF的生物学特性
1.2.2 猪IMF研究现状
1.2.3 与IMF相关候选基因的研究进展
1.2.4 与IMF相关通路研究进展
1.3 miRNAs是调节猪IMF的重要因素
1.3.1 miRNAs的概述
1.3.2 与IMF相关miRNAs的研究进展
1.4 miR-365-3p与候选靶基因PGK1和CXHXorf23的研究
1.4.1 miR-365-3p的研究现状
1.4.2 PGK1和CXHXorf23基因与IMF相关研究
1.5 本研究的目的和意义
2 材料和方法
2.1 材料
2.1.1 猪组织样品
2.1.2 菌株、细胞和载体
2.1.2.1 试验用菌株
2.1.2.2 试验用细胞系
2.1.2.3 试验用载体
2.1.3 主要试剂及设备
2.1.3.1 主要试剂
2.1.3.2 主要设备
2.1.4 主要试剂的配制
2.1.5 主要软件及数据库
2.2 方法
2.2.1 猪背最长肌组织肌内脂肪的测定
2.2.2 猪高、低IMF组DEM和DEG的筛选与鉴定
2.2.2.1 组织切片油红染色
2.2.2.2 猪背最长肌总RNA抽提及检测
2.2.2.3 RT-PCR
2.2.2.4 高、低IMF组差异miRNA和基因的筛选
2.2.3 猪IMF GWAS材料准备
2.2.4 定量引物设计及条件优化
2.2.5 实时荧光定量PCR(Q-PCR)
2.2.6 细胞培养及其成脂诱导过程
2.2.6.1 C2C12细胞的培养
2.2.6.2 C2C12细胞成脂诱导过程
2.2.7 细胞转染
2.2.8 双荧光素酶检测
2.3 引物序列
2.4 本实验的技术路线
3 结果
3.1 猪IMF性状的表型变异结果
3.1.1 猪IMF性状表型结果
3.1.2 组织冰冻切片油红O染色检测
3.2 猪IMF GWAS分析结果
3.3 高低肌内脂肪组DEM、DEG筛选奠定
3.3.1 样品的选择标准
3.3.2 DEM和DEG的筛选结果
3.3.3 DEM和DEG的鉴定结果
3.4 猪miR-365-3p的靶基因预测及其组织表达检测结果
3.4.1 猪miR-365-3p的靶基因预测
3.4.2 猪miR-365-3p、PGK1基因和CXHXorf23基因的组织表达谱
3.5 猪miR-365-3p和PGK1、CXHXorf23基因的靶向关系验证
3.5.1 双荧光素酶报告基因实验鉴定猪miR-365-3p分别与PGK1基因、CXHXorf23基因的靶向关系验证
3.5.2 C2C12细胞诱导成脂及脂肪形成相关Maker基因的检测
3.5.3 猪miR-365-3p在高低IMF组和C2C12细胞诱导成脂过程中的表达模式结果
3.5.4 PGK1、CXHXorf23基因在高低IMF组和C2C12细胞诱导成脂过程中的表达模式结果
3.5.5 超表达miR-365-3p对不同脂肪相关Maker基因和靶基因的影响
4 讨论
4.1 miR-365-3p在高低IMF组和C2C12细胞诱导成脂过程表达模式
4.2 与肌内脂肪沉积相关miRNAs和基因的筛选
4.3 PGK1和CXHXorf23基因在不同组织中的表达
4.4 miR-365-3p对C2C12成脂诱导分化的作用
4.5 关于miR-365-3p靶向作用PGK1和CXHXorf23基因的应用
5 小结
5.1 本研究得到的结果
5.2 本研究的创新点
5.3 本研究的不足及下一步工作意见
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪PID1基因CDS区的克隆及其mRNA表达与肌内脂肪沉积关系[J]. 钱源,曾勇庆,杜金芳,崔景香,李华,陈其美,宋一萍,陈伟. 遗传. 2010(11)
[2]猪肌内脂肪的研究进展[J]. 谭林,姜海龙. 畜牧与饲料科学. 2010(09)
[3]牛肌内脂肪的研究进展[J]. 董丹萍,马俪珍. 农产品加工. 2010(08)
[4]日粮能量蛋白质水平对荣昌烤乳猪品系生长性能和肉质性状的影响[J]. 陈德志,余冰,陈代文. 动物营养学报. 2009(05)
[5]日粮能量水平对生长育肥猪肌内脂肪含量以及脂肪酸合成酶和激素敏感脂酶mRNA表达的影响[J]. 刘作华,杨飞云,孔路军,周晓容,辜玉红,王孝友. 畜牧兽医学报. 2007(09)
[6]猪肌内脂肪酸的研究进展[J]. 李庆岗,经荣斌. 饲料博览. 2004(03)
[7]肌肉内脂肪的研究进展[J]. 侯生珍. 甘肃畜牧兽医. 2000(03)
本文编号：3321926
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