大片形吸虫ES与宿主互作抗原的筛

发布时间：2021-08-05 23:32

　　片形吸虫不仅感染牛羊等反刍动物,而且也可感染人体,严重威胁着人和动物的健康。因此,建立高效准确的诊断方法是防控该病的研究重点。片形吸虫包括肝片形吸虫、大片形吸虫及其中间型,目前对于大片形吸虫及其中间型的相关研究相对较少。因此,本研究选择大片形吸虫为研究对象,通过对大片形吸虫排泄分泌（ES）抗原与宿主的互作,旨在筛选、鉴定及分析出具有诊断潜力的蛋白,为建立大片形吸虫的诊断方法奠定基础。本研究分为三部分。第一部分,对大片形吸虫的鉴定。首先,将采自广西南宁的144条片形吸虫虫体进行形态学鉴定和分子生物学鉴定。形态学鉴定这144条虫体均为片形吸虫。对这144条虫体的核糖体第二内转录间隔区（ITS-2）序列进行了扩增、测序,结果表明144个PCR样品的测序结果区别于肝片形吸虫及中间型,而均与大片形吸虫ITS-2序列（GenBank accession AJ557569）匹配率达99.7%,从而判定分离得到的144条片形吸虫均为大片形吸虫,不含中间型。第二部分,大片形吸虫ES抗原的制备及互作抗原的筛选。首先,利用体外培养方法收集大片形吸虫虫卵,对虫卵进行体外培养孵出毛蚴感染淡水螺,使其在淡水螺体内... 

【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
    1.1 片形吸虫与片形吸虫病
        1.1.1 病原
        1.1.2 生活史
        1.1.3 流行情况
        1.1.4 防控
    1.2 大片形吸虫病诊断的研究进展
        1.2.1 经典方法
        1.2.2 免疫诊断方法
        1.2.3 吸虫抗原的检测
        1.2.4 分子生物学方法
    1.3 研究的目的与意义
2 材料与方法
    2.1 大片形吸虫的鉴定
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
    2.2 大片形吸虫ES抗原的制备及互作抗原的筛选
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
    2.3 大片吸虫AT和LAP蛋白的免疫反应性分析
        2.3.1 材料
        2.3.2 方法
3 结果与分析
    3.1 大片形吸虫的鉴定
        3.1.1 大片形吸虫形态学鉴定结果
        3.1.2 大片形吸虫ITS
        3.1.3 大片形吸虫ITS
    3.2 大片形吸虫ES抗原的制备及互作抗原的筛选
        3.2.1 大片形吸虫ES抗原免疫家兔后制备多抗的间接ELISA结果
        3.2.2 免疫共沉淀SDS
        3.2.3 质谱数据分析
    3.3 大片形吸虫AT和LAP蛋白的免疫反应性分析
        3.3.1 大片形吸虫FgAT和FgLAP基因的PCR扩增结果
        3.3.2 FgAT和FgLAP的理化特性、结构功能域和三级结构预测
        3.3.3 重组质粒pGEX-6P-1(+)-FgAT和pET-30a-FgLAP的双酶切结果
        3.3.4 重组蛋白的诱导表达结果
        3.3.5 重组蛋白pGEX-6P-1(+)-FgAT和pET-30a-FgLAP的纯化结果
        3.3.6 目的蛋白的Western Blot分析
4 讨论
    4.1 大片形吸虫的鉴定
    4.2 大片形吸虫ES抗原的制备及互作抗原的筛选
    4.3 大片形吸虫AT和LAP蛋白的免疫反应性分析
5 结论
参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3324642