玉屏风多糖合生元对獭兔免疫功能和肠道菌群结构的影响

发布时间：2017-04-28 10:09

  本文关键词：玉屏风多糖合生元对獭兔免疫功能和肠道菌群结构的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本研究通过体内外试验,旨在探讨未发酵玉屏风多糖(UYP)和少孢根霉菌SH发酵的玉屏风多糖合生元(FYP)的单糖构成、免疫活性及其对獭兔肠道菌群和屏障的影响。将不同浓度的UYP或FYP同正常或经脂多糖(LPS)诱导的小鼠免疫细胞孵育,探究其体外免疫活性；选取45只断奶獭兔,预饲一周后随机分为对照组(NC)、UYP组和FYP组,分别饲喂含1%o生理盐水、UYP和FYP的基础日粮,持续28 d,探究体内免疫活性和对獭兔肠道菌群及屏障的影响。结果如下：1. GC-MS测得UYP和FYP的单糖主要是果糖和吡喃葡萄糖苷,FYP中毗喃葡萄糖苷较UYP显著提高(P0.01)。2.MTT试验表明,UYP、FYP和LPS均显著促进小鼠免疫细胞增殖(P0.01),但前两者的活性均显著低于LPS(P0.01)：FYP对巨噬细胞增殖的影响显著强于UYP(P0.01),部分浓度的FYP对淋巴细胞增殖的影响也显著强于UYP(P0.05或P0.01);此外,UYP和FYP均显著降低经LPS诱导的小鼠淋巴细胞的增殖活性(P0.01),分别在3.200 mg/mL和0.200 mg/mL时脾脏淋巴细胞增殖活性与正常细胞差异不显著(P0.05),且均在0.800 mg/mL时胸腺淋巴细胞增殖活性与正常细胞差异不显著(P0.05),但FYP处理后更接近正常胸腺淋巴细胞增殖活性。3.中性红试验表明,UYP和FYP均显著提高小鼠巨噬细胞的吞噬能力和合成NO能力(P0.01)。FYP较UYP显著增强其吞噬活性(P0.01),在0.050 mg/mL及以上浓度时显著促进其释放NO(P0.01),但均显著低于LPS的作用(P0.01)。4.rtPCR分析UYP和FYP体外对小鼠免疫细胞基因表达的影响,结果表明,LPS显著上调炎性细胞因子、TLR4、NF-κB和iNOS的表达(P0.01),UYP显著上调脾淋巴细胞TLR4和NF-κB的表达(P0.05),FYP显著上调巨噬细胞iNOS、脾淋巴细胞TLR4(P0.01)和淋巴细胞NF-r,B的表达(P0.05),且FYP活性高于UYP,但显著低于LPS(P0.01)。此外,UYP和FYP显著抑制经LPS诱导的炎性细胞因子、TLR4、NF-κB (P0.01)和iNOS (P0.05)的表达；FYP较UYP显著降低巨噬细胞TLR4、NF-κB和胸腺淋巴细胞TLR4的表达(P0.01)。5.獭兔体内试验表明,UYP(P0.05)和FYP(P0.01)均显著提高獭兔平均日增重,FYP的活性显著高于UYP(P0.01)；且两者均显著提高其脾脏指数(P0.01),FYP的活性显著高于UYP(P0.05)。6.rtPCR分析表明,UYP和FYP均能促进獭兔脾脏中细胞因子的表达,FYP更有效的上调IL-2、TNF-α和IL-10的mRNA水平(P0.05)。ELISA检测表明,UYP和FYP均提高獭兔血清中IL-2、IL-4、IL-12、TNF-α和IFN-γ的蛋白浓度,FYP较UYP更有效的上调血清中细胞因子的蛋白浓度,其中IL-2、IL-6、TNF-α和IL-10显著提高(P0.05或P0.01)。7. rtPCR分析表明,UYP显著上调獭兔空肠(P0.05)、回肠和脾脏(P0.01)中TLR2及回肠、盲肠和脾脏(P0.01)中TLR4的表达,FYP显著促进空肠、回肠和脾脏中TLR2及空肠、回肠、盲肠和脾脏中TLR4的表达(P0.01)；FYP较UYP显著增加空肠(P0.05)和回肠(P0.01)中TLR2及空肠(P0.05)和脾脏(P0.01)中TLR4的表达。8. PCR-DGGE分析獭兔肠道菌群结构表明,空肠和回肠中UYP组和FYP组间DGGE图谱相似性较高；聚类图显示,空肠和回肠中的UYP组和FYP组聚为一簇；PCA图显示,PCAl将空肠和回肠的UYP组和FYP组与NC组分开；空肠和回肠中UYP组和FYP组的菌群多样性均显著高于NC组(P0.05或P0.01);FYP较UYP更能提高空肠(P0.05)和回肠的菌群多样性。9. rtPCR分析獭兔肠道菌群丰度表明,UYP和FYP显著提高空肠和回肠总菌、拟杆菌门、厚壁菌门、普雷沃氏菌属、丁酸弧菌和梭菌类型Ⅳ、XIVa(P0.01)和空肠中乳酸菌属的丰度(P0.05),降低空肠和回肠肠球菌属(P0.01或P0.05)和回肠中链球菌属的丰度(P0.01)；FYP较UYP显著提高回肠中总菌、厚壁菌门、丁酸弧菌(P0.01)和空肠中产琥珀酸丝状杆菌的丰度(P0.05),降低回肠中肠杆菌科、肠球菌属和空肠中肠球菌属的丰度(P0.01)。10.rtPCR分析獭兔肠道屏障基因表明,FYP显著上调空肠中p-防御素、EGF(P0.05)、TFF(P0.01)和回肠中ZO-1、封闭蛋白、p-防御素、TFF(P0.05)、PIGR和EGF(P0.01)的表达；FYP较UYP显著提高空肠中EGF(P0.05)和回肠中ZO-1、封闭蛋白(P0.05)、PIGR和EGF(P0.01)的表达。综上所述,UYP和FYP具有双向体外免疫活性,并可增强獭兔的免疫、改善其空肠和回肠菌群结构及屏障功能,且FYP的效果强于UYP。
【关键词】：獭兔 玉屏风多糖 少孢根霉菌 免疫功能 肠道菌群
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S829.1
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 符号说明9-12
• 1 前言12-21
• 1.1 中药对免疫的影响12-15
• 1.1.1 中药促进机体生长和免疫器官发育12-13
• 1.1.2 促进抗体形成和提高抗体含量13
• 1.1.3 促进免疫细胞增殖活性13-14
• 1.1.4 调控细胞因子合成14-15
• 1.1.5 中草药的双向免疫调节作用15
• 1.2 中药对肠道菌群的影响15-16
• 1.3 中药对肠道屏障的影响16
• 1.4 复方玉屏风对免疫的影响16-18
• 1.5 复方玉屏风对肠道菌群及肠道屏障的影响18
• 1.6 少孢根霉菌的应用18-19
• 1.7 中药合生元的研究进展19-21
• 1.7.1 合生元的概念19
• 1.7.2 中药合生元对免疫的影响19-20
• 1.7.3 中药合生元对肠道菌群及肠道屏障的影响20-21
• 2 目的和意义21-22
• 3 材料与方法22-33
• 3.1 试验材料22
• 3.2 试验动物及日粮22
• 3.3 主要试剂22
• 3.4 主要仪器22
• 3.5 试验方法22-32
• 3.5.1 菌种的鉴定与驯化22-24
• 3.5.2 玉屏风多糖合生元的制备24-26
• 3.5.3 玉屏风多糖单糖构成测定26
• 3.5.4 小鼠免疫细胞的获得26
• 3.5.5 细胞增殖转化试验26-27
• 3.5.6 腹腔巨噬细胞吞噬试验27
• 3.5.7 腹腔巨噬细胞释放NO试验27-28
• 3.5.8 实时PCR(rtPCR)测定细胞中细胞因子表达28-29
• 3.5.9 獭兔试验及采样29
• 3.5.10 血清中细胞因子测定29
• 3.5.11 rtPCR分析细胞因子、TLR2和TLR4基因表达29
• 3.5.12 PCR-DGGE分析肠道菌群结构29-31
• 3.5.13 rtPCR分析功能性菌群丰度31
• 3.5.14 rtPCR分析肠道屏障功能相关基因表达31-32
• 3.6 数据分析32-33
• 4 结果33-45
• 4.1 菌种的鉴定结果33
• 4.2 少孢根霉菌SH对玉屏风多糖单糖组成的影响33-35
• 4.3 UYP和FYP对小鼠免疫细胞增殖活性的影响35-36
• 4.4 UYP和FYP对巨噬细胞吞噬活性和合成NO的影响36-37
• 4.5 UYP和FYP对小鼠免疫细胞细胞因子表达的影响37-39
• 4.6 UYP和FYP对獭兔日增重和器官指数的影响39
• 4.7 UYP和FYP对獭兔脾脏细胞因子表达的影响39-40
• 4.8 UYP和FYP对獭兔血清中细胞因子浓度的影响40
• 4.9 UYP和FYP对獭兔TLR2和TLR4表达的影响40-41
• 4.10 UYP和FYP对獭兔肠道菌群结构的影响41-42
• 4.11 UYP和FYP对獭兔肠道功能性菌属的影响42
• 4.12 UYP和FYP对獭兔空肠和回肠屏障的影响42-45
• 5 讨论45-53
• 5.1 少孢根霉菌SH对玉屏风多糖单糖组成的影响45-46
• 5.2 玉屏风多糖合生元对免疫细胞增殖活性的影响46
• 5.3 玉屏风多糖合生元对巨噬细胞免疫活性的影响46-47
• 5.4 玉屏风多糖合生元体外对细胞因子等免疫相关基因的影响47-48
• 5.5 玉屏风多糖合生元对獭兔生长及器官指数的影响48
• 5.6 玉屏风多糖合生元对獭兔免疫功能的影响48-49
• 5.7 玉屏风多糖合生元对獭兔肠道菌群的影响49-52
• 5.8 玉屏风多糖合生元对獭兔肠道屏障的影响52
• 5.9 免疫、肠道菌群和肠道屏障的关系52-53
• 6 结论与展望53-54
• 6.1 结论53
• 6.2 展望53-54
• 参考文献54-68
• 致谢68-69
• 攻读学位期间发表的学术论文目录69

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本文编号：332610