狂犬病病毒N和G蛋白多克隆抗体的制备

发布时间：2021-08-07 17:08

　　狂犬病是由狂犬病病毒（rabies virus,RV）引起的人畜共患病急性传染病。人被RV感染后,一旦出现神经症状,几乎百分之百死亡,我国每年超过1000人死于狂犬病。可见,狂犬病严重威胁人类的健康。随着分子生物学、基因组学和蛋白组学的广泛应用,对RV各蛋白的功能、致病机制、出芽过程的研究取得巨大进展,但依旧没有完全透彻。透彻研究这些机制,将有助于治疗狂犬病药物的开发和免疫疫苗质量的提高。目前,由于缺乏适用的RV单克隆或多克隆抗体,严重阻碍了我们研究的步伐,适用抗体的研制已成为相关研究的前提条件。核蛋白（N）蛋白对病毒的转录复制至关重要,制备N蛋白抗体用于检测N蛋白表达量,继而评价病毒的转录复制能力。糖蛋白（G）是RV的主要保护性抗原,同时它还与病毒的嗜神经性、致病性密切相关,所以制备适用的G蛋白抗体十分必要。N蛋白的主要线性抗原结构区域位于360-383位氨基酸残基。本文以RC-HL N基因质粒为模板,利用两对引物RV-NF1/R1、 RV-NF2/R2分别扩增N1-2（350-410位氨基酸）、N3-4（360-451位氨基酸）两个片段。再利用RV-NF1和RV-NR2两条末端互补... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

N,.}片段的PCR扩增

回收目的片段后用T4连接酶进行连接，转化宿主菌TOP10，抽提质粒进行双酶切鉴定（图3-2),同时送到Invitrogen公司测序，测序正确将重组质粒命名为pET-N〗_4 0 -M 15000 bp ~h'.. M, _ pET-32ajHaHH t'iGI* ■ftiMMif ■‘ ^myB500 bp -jpr^- 4隊德_M-.'遞图3-2重组质粒PET-Nm双酶切鉴定Fig 3-2 Identification of pET-Nl-4 by restriction enzyme BamH I and Hind IIIM： DNA Marker DL5000； 1： pET-N 1-4/BamH I 和 Hind IIIM： DNA Marker DL5000； 1 ： pET-Nl-4 /BamH I and Hind III3.1.3 pET-Nl-4转化Rosetta重组菌的表达情况参照（2.3.6.2 )的操作步骤进行SDS-PAGE电泳分析重组菌的表达情况，发现30 °C、0.25 mM IPTG终浓度诱导表达7 h,重组菌表达了大约39 kd的重组蛋白，与预期结果相符（图3-3)，诱导的空载体、未诱导的空载体和未诱导重组菌没有出现此目的蛋白，证明重组质粒PET-Nm经IPTG诱导能在宿主菌内成功表达。26

发现30 °C、0.25 mM IPTG终浓度诱导表达7 h,重组菌表达了大约39 kd的重组蛋白，与预期结果相符（图3-3)，诱导的空载体、未诱导的空载体和未诱导重组菌没有出现此目的蛋白，证明重组质粒PET-Nm经IPTG诱导能在宿主菌内成功表达。26


本文编号：3328192