弓形虫酵母双杂交cDNA文库构建及与AMA1羧基端相互作用蛋白的筛选

发布时间：2021-08-08 05:10

　　弓形虫病的病原是刚地弓形虫，属于顶复门原虫，这一类病原微生物通过侵入宿主细胞并在其中生长复制，同时逃避宿主的免疫应答。宿主细胞的侵入和细胞内虫体的增值对于弓形虫的生活史和致病性非常重要。目前使用的抗虫体增殖的治疗方法，只能够有效阻断虫体扩散，但同时也会促使虫体发育，因此并不能阻止慢性感染。为了开发一种能真正达到彻底治疗弓形虫感染的药物，急需深入了解弓形虫调控虫体复制和发育的分子机制。本研究从弓形虫RH株cDNA中扩增AMA1c基因编码序列，并通过双酶切将AMA1c基因分别克隆至原核表达载体pColdIII和诱饵表达载体pGBKT7中，构建重组质粒pColdIII-AMA1c和pGBKT7-AMA1c。将pColdIII-AMA1c转化至大肠杆菌DH5a大量表达蛋白，之后用GST树脂柱对该蛋白进行了纯化，SDS-PAGE分析结果显示重组的AMA1c蛋白在原核表达系统中得到大量表达。将蛋白免疫小鼠制备抗血清，Western blot检测表明制备的血清具有良好的特异性。同时用制备的抗血清为一抗对AMA1c定位，激光共聚焦观察到AMA1c定位于弓形虫的顶端。为筛选弓形虫AMA1羧基端基因在弓形... 

【文章来源】：吉林农业大学吉林省

【文章页数】：44 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩略表
第一章 绪论
    1.1 弓形虫概述
    1.2 弓形虫病的类型及临床表现
    1.3 弓形虫 AMA1 的研究进展
    1.4 酵母双杂交的应用
    1.5 本研究的目的与意义
第二章 AMA1 羧基端抗血清的制备及鉴定
    2.1 实验材料
    2.2 实验方法
    2.3 实验结果
    2.4 讨论
第三章 弓形虫 RH 株文库的构建及检测重组诱饵蛋白的自激活
    3.1 实验材料
    3.2 实验方法
    3.3 实验结果
    3.4 讨论
第四章 AMA1 羧基端蛋白相互作用细胞蛋白的筛选及验证
    4.1 实验材料
    4.2 实验方法
    4.3 实验结果
    4.4 讨论
结论
参考文献
作者简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪外周血单个核细胞cDNA酵母表达文库的构建及与猪瘟病毒E2蛋白相互作用细胞蛋白的筛选[J]. 廖亚金,李素,贺番,何文瑞,董泓,冯烁,孙元,仇华吉.  中国预防兽医学报. 2013(09)
[2]葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的研究进展[J]. 安选,刘良忠,胡鹏.  中国生物制品学杂志. 2011(06)
[3]DEV-NP基因酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活检测[J]. 张荷,代淑燕,毛君婷,王开功,周碧君,文明.  生物技术通报. 2011(03)
[4]运动疲劳对大鼠纹状体单胺类递质含量及多巴胺受体表达的影响[J]. 侯莉娟,刘晓莉,乔德才.  中国康复医学杂志. 2010(07)
[5]抗弓形虫核酸疫苗的研究进展[J]. 剡海阔,彭高辉,袁子国,朱兴全.  中国人兽共患病学报. 2009(10)
[6]广州市125万新生儿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查和防治[J]. 江剑辉,李蓓,曹伟锋,蒋翔,贾雪芳,陈倩瑜.  广东医学. 2009(09)
[7]应用酵母双杂交系统初步筛选IBDV VP2结合蛋白[J]. 袁维峰,吴保明,张鑫宇,张泉,孙怀昌.  畜牧兽医学报. 2009(06)
[8]长春地区孕产妇和肿瘤病人血清弓形虫抗体IgG的检测[J]. 刘全,袁子国,高胜岩,刘斌,刘晓枫.  中国病原生物学杂志. 2008(02)
[9]人畜共患寄生虫病危害与公共卫生意义(中)[J]. 汪明.  动物保健. 2006(09)
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硕士论文
[1]15种中药抗弓形虫效果的比较研究[D]. 程雪娇.延边大学 2007
[2]弓形虫SAG2基因的测序、检测及表达[D]. 陈志强.湖南农业大学 2007



本文编号：3329292