猪APOA2启动子与转录因子GATA1作用的研究

发布时间：2021-08-08 07:21

　　对猪APOA2潜在启动子区进行克隆及活性分析,确定核心启动子区域,并进一步分析转录因子GATA1对APOA2基因转录活性的影响。结果表明,APOA2基因主要在猪的肝脏及脂肪组织中表达。双荧光素酶活性显示,猪APOA2基因5′端侧翼-813～-565 bp区域为核心启动子区,且-659～-565 bp区域内更可能存在一些促进APOA2转录的顺式作用元件。过表达GATA1基因结果显示,转录因子GATA1显著促进APOA2基因的转录;定点突变试验确认,转录因子GATA1可直接与APOA2基因启动子区的GATA1结合位点（-608～-599 bp）相结合。转录因子GATA1可直接靶向APOA2基因启动子区并促进APOA2的转录。 

【文章来源】：湖北农业科学. 2020,59(22)

【文章页数】：5 页

【部分图文】：

猪APOA2基因在不同组织中的表达量

利用PCR技术从大白猪基因组DNA中扩增获得7个长度逐级缺失的APOA2启动子片段，并连接至p GL3-Basic双荧光素报告载体中，构建7个启动子双荧光素酶报告载体，命名为APOA2-1至APOA2-7。将构建的荧光载体质粒进行双酶切鉴定，释放出的片段与预期结果相符（图2），表明载体构建成功。将构建成功的7个启动子载体质粒与p GL3-Basic质粒分别转染C2C12、3T3-L1及PK-15细胞，24 h后测定双荧光素酶活性。结果表明，APOA2-1、APOA2-2、APOA2-3均具有荧光活性但相对较低；APOA2-4活性显著上升，表明-813～-565 bp区域内可能存在一个或多个促进APOA2基因转录的顺式作用元件；APOA2-5活性降低，表明-1 032～-813 bp区域内可能存在一个或多个抑制APOA2基因转录的顺式作用元件；APOA2-6、APOA2-7活性略有回升（图3）。

将构建成功的7个启动子载体质粒与p GL3-Basic质粒分别转染C2C12、3T3-L1及PK-15细胞，24 h后测定双荧光素酶活性。结果表明，APOA2-1、APOA2-2、APOA2-3均具有荧光活性但相对较低；APOA2-4活性显著上升，表明-813～-565 bp区域内可能存在一个或多个促进APOA2基因转录的顺式作用元件；APOA2-5活性降低，表明-1 032～-813 bp区域内可能存在一个或多个抑制APOA2基因转录的顺式作用元件；APOA2-6、APOA2-7活性略有回升（图3）。对APOA2-4区域进一步构建5个荧光载体并进行活性分析，载体命名为2-APOA2-1至2-APOA2-5。双荧光素酶活性分析结果表明，2-APOA2-1活性最高，约为APOA2-3活性的5倍（图4），表明-659～-565 bp区域更可能存在顺式作用元件。


本文编号：3329501