单精注射制备转基因猪胚胎技术的研究

发布时间：2021-08-09 08:02

　　转基因动物研究开始于上个世纪七十年代末,是一项能对家畜基因组进行修饰的有效技术,对改进畜牧业生产效率有重大的作用。目前转基因技术有原核注射法、精子介导法、逆转录病毒感染法和体细胞移植法等。将精子载体转基因法（SMGT）与单精注射（ICSI）结合制备转基因动物是一种新的转基因技术,研究历史较短,但其可行性和高效性已在多个物种得到试验证实。BAC作为转基因载体,可携带的基因包括上下游调控序列,可以和转录酶、转录因子等作用,转基因将能遵守基因固有的表达机制。所以将ICSI-SMGT技术与BAC转基因技术相结合制备转基因猪,为我们今后制备大片段转基因猪提供了新方法,具有广阔的应用前景。为成功制备转基因猪胚胎,本课题将从猪卵母细胞延迟保存与体外培养和以单精注射技术与BAC载体技术相结合为目标的两个方面进行研究。第一方面,建立猪卵母细胞体外延迟保存体系,拟设计先将卵母细胞分别放入TCM199（含HEPE）、PBS缓冲液（无Ca2+和Mg2+）和DMEM低糖培养基中37℃保存6-8h后转入成熟培养液与瞬时放入成熟培养液的对照组作比较,统计分析试验组之间成熟率,卵裂率和囊胚率的差别。其中对照组成熟率为... 

【文章来源】：浙江师范大学浙江省

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

BACDNA的EcoRI和BamHI醉切鉴定电泳图

3.2 BAC DNA的Not I醉切鲞定电泳图，酶切后得到大小为9000bp左右和远预期，酶切鉴定BAC质粒正确。培养液保存卵母细胞对卵母细胞标准为：卵母细胞裹有的卵丘细胞均已实验，采集有效COCs共3190枚，其枚，得到78.19%的成熟率；TCM199，成熟率为76.25%，p=0.2275(p>0.05)

1 345 2672 330 249对照组3 355 289平均数 344 269 71 320 2432 320 237TCM1993 320 252平均数 320 244 71 200 98,…+ 2 200 95PBS缓冲液3 200 102平均数 200 98 41 200 95,一—# 2 200 92DMEM低糖培养基3 200 98平均数 200 95 4

【参考文献】：
期刊论文
[1]猪胞浆内单精子注射研究进展[J]. 张廷宇,马恒东.  中国生物工程杂志. 2009(02)
[2]胞质内单精子注射精子的研究进展[J]. 赵西彪,杨欢利,于钦秀,丁家桐.  牡丹江医学院学报. 2007(04)
[3]精子介导法制备转基因猪的研究[J]. 刘羞菲,苗向阳,白林,张红涛.  中国农学通报. 2007(07)
[4]单精注射法生产转GFP基因猪胚胎的研究[J]. 苗向阳,方昌阁,邵建军,朱瑞良,任慧英.  中国畜牧兽医. 2007(06)
[5]转基因猪的研究现状及应用前景[J]. 崔文涛,单同领,李奎.  中国畜牧兽医. 2007(04)
[6]第一极体位置对卵胞浆内单精子显微注射结局的影响[J]. 胡京美,李媛,陈子江,卢少明,李梅,马水英.  中国优生与遗传杂志. 2007(03)
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[8]单精子显微注射技术的研究及其前景展望[J]. 苗向阳.  中国农学通报. 2006(12)
[9]影响猪ICSI转基因技术效率的主要因素研究[J]. 刘成军,曾申明,万鹏程,郝泽东.  中国畜牧杂志. 2006(17)
[10]人工染色体载体系统的研究进展[J]. 姚春馨,吴成军,程在全,黄兴奇.  云南农业大学学报. 2006(02)

博士论文
[1]牛卵母细胞及体外胚培养技术研究[D]. 桑国俊.甘肃农业大学 2008



本文编号：3331695