产甘油酿酒酵母GPD1基因超表达突变株的构建及其生物学特性研究

发布时间：2021-08-11 17:53

　　随着我国奶牛业的快速发展,奶牛酮病发病率不断升高,对奶牛的健康和生产性能产生严重的影响。围产期的奶牛,尤其是高产奶牛,因胎儿生长和泌乳对能量的需求增加,干物质摄入量降低,致使能量摄入不能满足能量需求而出现能量负平衡,为了弥补能量赤字,机体动员体脂,过度的脂肪动员就会导致酮病的发生。反刍动物因瘤胃代谢特点几乎不能从瘤胃中直接摄取葡萄糖,机体所需的葡萄糖有90%是通过糖异生获得,而甘油作为重要的生糖物质,与糖代谢关系十分密切,可有效解决反刍动物因糖供应不足而发生的能量代谢问题。发酵法生产甘油,具有清洁安全等特点,因而受到广泛的关注。产甘油酿酒酵母NAU-ZH-GY1是拥有本实验自主知识产权,同时酿酒酵母菌也是农业部公布的允许作为饲用的益生菌,对其进行基因改造,提高甘油产量,将其发酵液制成饲料添加剂,发挥益生菌和甘油生糖的双重功效。本课题组已成功地敲除了酿酒酵母NDE1基因,以酿酒酵母代谢原理为基础,以缺失NDE1基因的酿酒酵母菌NAU-ZH-GY1-nde1△为出发菌株,超表达GPD1基因,3-磷酸甘油脱氢酶（Gpd1蛋白）的含量增加,催化磷酸二羟丙酮加氢还原3-磷酸甘油,明显提高甘油生成... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图４．１质粒ｐＳＨ６５??Ｆｉｇｕｒｅ?４．１?ｐｌａｓｍｉｄ?ｐＵＧ６??

２．３．２测序??电泳鉴定之后，用Ｔａｋａｍ的胶回收试剂念进行胶回收，送Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司测??序，测序结果如图４．８所示。用ＤＮＡＭＡＮ软件进行分析，碱基相同。??１?公領，ＣＣ。广Ｃ广ＡＡ辨＆?？眶。占Ｔ厂加Ｃ厂Ｃ群厂瓦凸田??４１?ＡＣＣＴＴＣＴＣＡＡ?ＧＣＡＡＧＧＴＴＴＴ?ＣＡＧＴＡＴＡＡＴＧ?ＴＴＡＣＡＴＧＣＧＴ??８１?ＡＣＡＣＧＣＧＴＣＴ?ＧＴＡＣＡＧＡＡＡＡ?ＡＡＡＡＧＡＡＡＡＡ?ＴＴＴＧＡＡＡＴＡＴ??１２１?ＡＡＡＴＡＡＣＧ了了?Ｃ了了ＡＡ了ＡＣ了Ａ?ＡＣＡＴＡＡＣ了ＡＴ?ＡＡＡＡＡＡＡＴＡＡ??１６１?ＡＴＡＧＧＧＡＣＣＴ?ＡＧＡＣＴＴＣＡＧＧ?ＴＴＧＴＣＴＡＡＣＴ?ＣＣＴＴＣＣＴＴＴＴ??２０１?ＣＧＧＴＴＡＧＡＧＣ?ＧＧＡＴＧＴＧＧＧＧ?ＧＧＡＧＧＧＣＧＴＧ?ＡＡＴＧＴＡＡＧＣＧ??２４１?ＴＧＡＣＡＴＡＡＣＴ?ＡＡＴＴＡＣＡＴＧＡ?ＣＣＣＧＣＧＧＧＡＡ?Ａ??图４－８?ＰＣ民扩增ＣＹＣｒ测序结果??Ｆｉｇ．?４－８?Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ｏｆ?ＣＹＣｌ??阴影部分是上游引物：划线部分，从上到下分别是Ｓｐｅｌ，ＳａｃＩＩ酶切位点??２．４载体ＰＧＣ的构建??２．４．１?ＴＰＧ载体的构建??限制性内切酶饼抗饼／ｃＡ仇＂戶／酶切１ＴＧ，结果如图４．９所??示：??Ｍ?１??誦＝ｚ??閣４．９载体ＴＰＧ酶切??Ｆｉｇ．４．９?Ｄｉｇｅｓｔｉｏ打?ｏｆ?ｖｅｄｏｒ?ＴＰＧ??Ｍ：?Ｍａｋｅｒ?３?；?１．?ＴＰＧ载体的酶切鉴定??３６??

图４－１０?ＰＰＧ的酶切鉴定??Ｆｉｇ．?４－１０?Ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ?ｏｆ?ｐｌａｓｍｉｄ?ＰＰＧ?ｂｙ?ＥｃｏＲＶ?ａｎｄ?Ｓｐｅｌ??Ｍ：?Ｍａｋｅｒ?３１．ＰＰＧ鉴小为４００９?ｂ和２２００?ｂ

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
[1]奶牛能量代谢障碍性疾病微生态制剂的研制及其效果评价[D]. 孙国权.吉林大学 2010



本文编号：3336616