畜禽粪便中常见致病菌现场快速一体化检测方法研究
发布时间：2021-08-13 23:27
随着集约化畜禽养殖业的发展,畜禽养殖粪便的产生量也随之增加。畜禽粪便的不合理处理与处置对水、空气和土壤均会造成一定程度的污染,尤其是畜禽粪便中的致病微生物可能会造成人畜共患病的传播,不仅阻碍畜禽养殖业的健康发展,而且危害人们的健康,甚至引起公共卫生事故。因此,掌握畜禽养殖粪便中典型微生物的污染现状及规律,并建立一套可操作性强、结果判定方便的现场快速一体化检测方法是非常有必要的。本研究根据畜禽养殖场现场条件的特点,借助载正电荷材料对细菌高效富集和环介导等温扩增技术（LAMP）技术快速检测的特性,建立起增菌-富集-LAMP检测一体化的粪便中常见致病菌现场快速检测体系,同时利用固定酶底物法和PCR技术对天津市3个畜禽种类的9家养殖场粪便中的指示微生物（总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌）和致病微生物（沙门氏菌）进行现场调查。主要研究结果如下:（1）畜禽粪便种类不同,其指示微生物的数量存在显著差异,未经无害化处理的猪粪、鸡粪、牛粪中指示微生物数量范围分别为107～109 MPN·g-1、106～10
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
目的序列上6个特异区域及引物设计
中国农业科学院硕士学位论文第一章绪论5合酶的作用下由3’端向5’端进行配对延伸，形成与模板互补的新链，如图1-2（李阳，2018）。图1-2LAMP扩增第一步Fig.1-2ThefirststepofLAMP第二步：外引物F3与模板DNA链外侧的F3c区域碱基互补结合，在BstDNA聚合酶的作用下以F3引物的3’端为起点继续向下配对延伸，合成新的DNA链，与此同时在第一步以FIP引物合成的DNA互补单链被置换下来，如图1-3（李阳，2018）。图1-3LAMP扩增第二步Fig.1-3ThesecondstepofLAMP第三步：在第二步中被新合成的DNA链置换下来的单链DNA的5’端由F1c、F2、F1三段组成，在单链状态下，F1c区段和F1区段会进行自我碱基配对由此形成环状结构。与此同时，内引物BIP的B2区段与B2c区段结合，以B2的3’端为起点开始合成单链的互补链，在合成的过程中环状结构被打开；随后，外引物B3与DNA模板链上的B3c区域碱基互补并继续向下延伸形成新的双链，同时置换出BIP合成的DNA单链，该链的两端均发生自我碱基配对，形成哑铃状链结构，如图1-4（李阳，2018）。
中国农业科学院硕士学位论文第一章绪论5合酶的作用下由3’端向5’端进行配对延伸，形成与模板互补的新链，如图1-2（李阳，2018）。图1-2LAMP扩增第一步Fig.1-2ThefirststepofLAMP第二步：外引物F3与模板DNA链外侧的F3c区域碱基互补结合，在BstDNA聚合酶的作用下以F3引物的3’端为起点继续向下配对延伸，合成新的DNA链，与此同时在第一步以FIP引物合成的DNA互补单链被置换下来，如图1-3（李阳，2018）。图1-3LAMP扩增第二步Fig.1-3ThesecondstepofLAMP第三步：在第二步中被新合成的DNA链置换下来的单链DNA的5’端由F1c、F2、F1三段组成，在单链状态下，F1c区段和F1区段会进行自我碱基配对由此形成环状结构。与此同时，内引物BIP的B2区段与B2c区段结合，以B2的3’端为起点开始合成单链的互补链，在合成的过程中环状结构被打开；随后，外引物B3与DNA模板链上的B3c区域碱基互补并继续向下延伸形成新的双链，同时置换出BIP合成的DNA单链，该链的两端均发生自我碱基配对，形成哑铃状链结构，如图1-4（李阳，2018）。
本文编号：3341325
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
目的序列上6个特异区域及引物设计
中国农业科学院硕士学位论文第一章绪论5合酶的作用下由3’端向5’端进行配对延伸，形成与模板互补的新链，如图1-2（李阳，2018）。图1-2LAMP扩增第一步Fig.1-2ThefirststepofLAMP第二步：外引物F3与模板DNA链外侧的F3c区域碱基互补结合，在BstDNA聚合酶的作用下以F3引物的3’端为起点继续向下配对延伸，合成新的DNA链，与此同时在第一步以FIP引物合成的DNA互补单链被置换下来，如图1-3（李阳，2018）。图1-3LAMP扩增第二步Fig.1-3ThesecondstepofLAMP第三步：在第二步中被新合成的DNA链置换下来的单链DNA的5’端由F1c、F2、F1三段组成，在单链状态下，F1c区段和F1区段会进行自我碱基配对由此形成环状结构。与此同时，内引物BIP的B2区段与B2c区段结合，以B2的3’端为起点开始合成单链的互补链，在合成的过程中环状结构被打开；随后，外引物B3与DNA模板链上的B3c区域碱基互补并继续向下延伸形成新的双链，同时置换出BIP合成的DNA单链，该链的两端均发生自我碱基配对，形成哑铃状链结构，如图1-4（李阳，2018）。
中国农业科学院硕士学位论文第一章绪论5合酶的作用下由3’端向5’端进行配对延伸，形成与模板互补的新链，如图1-2（李阳，2018）。图1-2LAMP扩增第一步Fig.1-2ThefirststepofLAMP第二步：外引物F3与模板DNA链外侧的F3c区域碱基互补结合，在BstDNA聚合酶的作用下以F3引物的3’端为起点继续向下配对延伸，合成新的DNA链，与此同时在第一步以FIP引物合成的DNA互补单链被置换下来，如图1-3（李阳，2018）。图1-3LAMP扩增第二步Fig.1-3ThesecondstepofLAMP第三步：在第二步中被新合成的DNA链置换下来的单链DNA的5’端由F1c、F2、F1三段组成，在单链状态下，F1c区段和F1区段会进行自我碱基配对由此形成环状结构。与此同时，内引物BIP的B2区段与B2c区段结合，以B2的3’端为起点开始合成单链的互补链，在合成的过程中环状结构被打开；随后，外引物B3与DNA模板链上的B3c区域碱基互补并继续向下延伸形成新的双链，同时置换出BIP合成的DNA单链，该链的两端均发生自我碱基配对，形成哑铃状链结构，如图1-4（李阳，2018）。
本文编号：3341325
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