犬腺病毒的分离鉴定及犬腺病毒基因组文库的构建
发布时间：2021-08-14 03:18
犬腺病毒病（Canine adeno,CA）是由犬腺病毒（Canine adenovirus,CAV）感染引起的一种传染性疾病,本病广泛流行于家养犬、狐狸、郊狼和浣熊等动物中。犬自然感染CAV的发病率大于50%,死亡率高达25-40%。CAV常与犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）、犬细小病毒（Canine parvo virus,CPV）、犬副流感病毒（Canine parainfluenza virus,CPIV）等混合感染,增加了临床症状的复杂性。本研究通过对武汉部分宠物医院疑似CAV、CDV、CPV、CPIV感染的患病犬进行病毒的分离鉴定,分离获得4株CAV-Ⅱ毒株,1株CPV2b毒株,同时构建了CAV-ⅡWH-27分离株的全基因组文库,为CAV的流行病学调查及预防和控制CAV相关疾病提供参考数据。具体研究内容如下:1、犬源病毒的分离与鉴定从武汉部分宠物医院收集患病犬病料样品410份,选择85份病料样品接种MDCK细胞,有13份接种细胞后发生明显、稳定的细胞病变,表现为细胞肿胀变圆、聚集,呈"葡萄串"状或分散变圆的特征性病变。分别通过CAV、CDV...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pMl).I8-TVector图谱
Ａ：?ＷＨ－２５在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征Ｂ：?ＷＨ－２７在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征??Ｃ：?ＷＨ－１１６在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征Ｄ：?ＷＨ－１１７在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征??Ｅ：?ＷＨ－１２９在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征Ｆ：?ＷＨ－１６２在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征??丘ＷＨ－１８２在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征吐ＷＨ－２０１在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征??Ｉ：?ＷＨ－２０２在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征Ｊ：?ＷＨ－２的在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征??Ｋ：?ＷＨ－２０８在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征Ｌ?ＷＨ－２０９在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征??Ｍ：ＷＨ－２２０在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征Ｎ：正常ＭＤＣＫ细胞对照??４．１．３细胞病变样品核酸水平的检测??利用ＣＡＶ和ＣＰＶ引物，通过ＰＣＲ扩增ｎ份细胞病变样品（ＷＨ－２５，?ＷＨ－２７，??ＷＨ－１１６，?ＷＨ－１１７，?ＷＨ－１２９，?ＷＨ－１６２，?ＷＨ－１８２，?ＷＨ－２０１，?ＷＨ－２０２，?ＷＨ－２０３，?ＷＨ－２０８，??ＷＨ－２０９，?ＷＨ－２２０）。凝胶电泳结果显示：样品?ＷＨ－２７、ＷＨ－１６２、ＷＨ－２０１?和?ＷＨ－２０１??均扩增出１０３０ｂｐ的特异性片段，由于该对引物能区分ＣＡＶ－?Ｉ?（５０８ｂｐ卿ＣＡＶ－ＩＩ??（１０３０ｂｐ），所Ｗ表明?ＷＨ－２７、ＷＨ－１６２、ＷＨ－２０１、ＷＨ－２０１?属于?ＣＡＶ－ＩＩ?（如图?４－２??所示）。另外，ＷＨ－１８２扩增出５７化Ｐ的特异性片段属于ＣＰＶ?（如图４－３所示）。??
进而通过特异引物扩増１３份细胞病变样品（ＷＨ－２５，ＷＨ－２７，ＷＨ－Ｈ－１１７，?ＷＨ－１２９，?ＷＨ－１６２，?ＷＨ－１８２，?ＷＨ－２０１，?ＷＨ－２０２，?ＷＨ－２０３，?ＷＨ－２Ｈ－２０９，?ＷＨ－２２０）中是否有ＣＤＶ和ＣＰＩＶ感染。ＣＤＶ特异性引物ＲＴ－Ｐ应得到３３化Ｐ的片段，ＣＰＩＶ特异性引物ＲＴ－ＰＣ民扩増应得到６６７ｂｐ的胶电泳检测结果显示．１３分细胞病变样品均为阴性（如图４－４，?４－５所１?］?３?４?５?６?７?８?９?Ｍ?１０?１１?１２?１３??Ｍ?０?★??２０００ｂｐ￣｜ＪＱＰ｜｜｜ｊｙ｜??Ａ?Ｂ??图４－４；?ＣＤＶ引物民Ｔ－ＰＣ民扩增凝胶化泳检测结巧??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?２０００??１：?ＷＨ－２５；?２：?ＷＨ－２７；?３：?ＷＨ－１６２；?４：?ＷＨ－１８２；?５：?ＷＨ－１１６；??６：?ＷＨ－１１７；?７：?ＷＨ－１２９；?８：?ＷＨ－２０１；?９：?ＷＨ－２０２；?１０：?ＷＨ－２０３；??１１：?ＷＨ－２０８；?１２：?ＷＨ－２０９；?１３：?ＷＨ－２２０；?０：阴性对照。★：闽性对照??１?２?５?４?Ｍ?５?６?了?８?９?１０?１１?１：?１３?Ｍ?★?０??
本文编号：3341662
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：70 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pMl).I8-TVector图谱
Ａ：?ＷＨ－２５在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征Ｂ：?ＷＨ－２７在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征??Ｃ：?ＷＨ－１１６在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征Ｄ：?ＷＨ－１１７在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征??Ｅ：?ＷＨ－１２９在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征Ｆ：?ＷＨ－１６２在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征??丘ＷＨ－１８２在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征吐ＷＨ－２０１在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征??Ｉ：?ＷＨ－２０２在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征Ｊ：?ＷＨ－２的在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征??Ｋ：?ＷＨ－２０８在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征Ｌ?ＷＨ－２０９在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征??Ｍ：ＷＨ－２２０在ＭＤＣＫ细胞上的病变特征Ｎ：正常ＭＤＣＫ细胞对照??４．１．３细胞病变样品核酸水平的检测??利用ＣＡＶ和ＣＰＶ引物，通过ＰＣＲ扩增ｎ份细胞病变样品（ＷＨ－２５，?ＷＨ－２７，??ＷＨ－１１６，?ＷＨ－１１７，?ＷＨ－１２９，?ＷＨ－１６２，?ＷＨ－１８２，?ＷＨ－２０１，?ＷＨ－２０２，?ＷＨ－２０３，?ＷＨ－２０８，??ＷＨ－２０９，?ＷＨ－２２０）。凝胶电泳结果显示：样品?ＷＨ－２７、ＷＨ－１６２、ＷＨ－２０１?和?ＷＨ－２０１??均扩增出１０３０ｂｐ的特异性片段，由于该对引物能区分ＣＡＶ－?Ｉ?（５０８ｂｐ卿ＣＡＶ－ＩＩ??（１０３０ｂｐ），所Ｗ表明?ＷＨ－２７、ＷＨ－１６２、ＷＨ－２０１、ＷＨ－２０１?属于?ＣＡＶ－ＩＩ?（如图?４－２??所示）。另外，ＷＨ－１８２扩增出５７化Ｐ的特异性片段属于ＣＰＶ?（如图４－３所示）。??
进而通过特异引物扩増１３份细胞病变样品（ＷＨ－２５，ＷＨ－２７，ＷＨ－Ｈ－１１７，?ＷＨ－１２９，?ＷＨ－１６２，?ＷＨ－１８２，?ＷＨ－２０１，?ＷＨ－２０２，?ＷＨ－２０３，?ＷＨ－２Ｈ－２０９，?ＷＨ－２２０）中是否有ＣＤＶ和ＣＰＩＶ感染。ＣＤＶ特异性引物ＲＴ－Ｐ应得到３３化Ｐ的片段，ＣＰＩＶ特异性引物ＲＴ－ＰＣ民扩増应得到６６７ｂｐ的胶电泳检测结果显示．１３分细胞病变样品均为阴性（如图４－４，?４－５所１?］?３?４?５?６?７?８?９?Ｍ?１０?１１?１２?１３??Ｍ?０?★??２０００ｂｐ￣｜ＪＱＰ｜｜｜ｊｙ｜??Ａ?Ｂ??图４－４；?ＣＤＶ引物民Ｔ－ＰＣ民扩增凝胶化泳检测结巧??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?ＤＬ?２０００??１：?ＷＨ－２５；?２：?ＷＨ－２７；?３：?ＷＨ－１６２；?４：?ＷＨ－１８２；?５：?ＷＨ－１１６；??６：?ＷＨ－１１７；?７：?ＷＨ－１２９；?８：?ＷＨ－２０１；?９：?ＷＨ－２０２；?１０：?ＷＨ－２０３；??１１：?ＷＨ－２０８；?１２：?ＷＨ－２０９；?１３：?ＷＨ－２２０；?０：阴性对照。★：闽性对照??１?２?５?４?Ｍ?５?６?了?８?９?１０?１１?１：?１３?Ｍ?★?０??
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