脂质体转染制备转基因鹌鹑的研究
发布时间：2021-08-16 15:01
转基因禽类具有广泛应用前景，比如可以作为医用动物模型和生物反应器。目前，制备转基因家禽的方法有电转染法、反转录病毒法和脂质体转染法。经过分析各方法优缺点，拟采用脂质体转染胚盘细胞的方法探讨制备转基因鹌鹑的可行性，初步构建转基因鹌鹑的模型，为寻求制备转基因鹌鹑的最佳方法提供实验依据和基础。具体实验结果如下：（1）通过胚盘下腔注射的方法将经脂质体包裹的外源质粒pEGFP-C2转染胚盘细胞，质粒与脂质体lipofection-2000的最适包装比为1:2.5（μg:μL），在此浓度下，进行凝胶阻滞电泳质粒不会从脂质体中溢出。经过对胚盘进行甲醛固定操作，观察到注射的溴酚蓝存在于胚盘下腔中。（2）将处理后种蛋入孵到第6天，取出胚胎，经基因组PCR验证，检测到胚胎组织中存在pEGFP-C2质粒。说明本实验的注射方法可以将外源DNA注射入X期鹌鹑胚盘下腔中，并成功转染胚盘细胞。（3）对转基因后代的验证结果表明1只7日龄G0代鹌鹑的内脏组织中检测到肌胃和腺胃中有外源基因表达，测序结果与原序列比对正确；1只成年G0代转基因母鹌鹑的部分内脏组织中表达了绿色荧光蛋白；2只G0代转基因鹌鹑的外表可观察到绿色荧...
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pEGFP-C2质粒载体PCR鉴定结果
图 2 质 粒 的 线性 化 - 4 :质 粒线 性化 后； 5 ： 质 粒 线性 化i g u re 2 Th e li n e a ri z a ti o n o f th e p la s mz e d p la s mi d ;5 : N e ga ti v e c o nt r o l w it h 质 粒 均 为线 性 结 构， 5 号孔 为线 ，最 上面 为 环 状 结构 。 从图 中胶 阻滞 实 验结 果 粒 室温 条 件下 共孵 育 20 分 钟测 。每 孔 中质 粒 的用 量为 4 微质 粒 与 脂质 体的 包 装最 佳 比例 是 糖 间 隙， 其 表 面带 有 正电 荷， 在， 在 进行 电 泳 时 DN A 将 不能 向 脂 质 体 用量 过 少 时， 就 不能 完全 粒 - 脂质 体 凝 胶阻 滞 试 验 来确 定
图 3 质 粒- 脂 质 体 凝胶 阻 滞 结果 ～ 4 ：包 装比 依次 为 1 ：2 . 5、 1： 2 、1 ： 1 . 5、 1 e 3 Th e re s u lt s o f ge l b lo c k a mo n g li p o s o me a n d ～ 4 ：P a c k in g is in o rd e r :1 ：2 . 5 、1 ：2 、1 ：1 .从 菌液 中 提取 纯化 后 的 未 加入 脂 质体 的 从脂 质 体 溢 出的 质 粒 DN A 逐渐 减少 ， 1 号 比例 大 小， 在比 例 为 1 : 2. 5 时 ，质 粒 不会 转 染实 验 。 及优 越 性 胞 膜， 是 由 脂 质双 分 子 层组 成 的， 磷 脂 分 一 种 囊状 物被 称 为 脂 质小 体 。阳 离子 脂
【参考文献】：
期刊论文
[1]转基因动物研究的技术思路[J]. 刘西梅,乔宪凤,张立苹,程妮,毕延震,李莉,肖红卫,华再东,华文君. 湖北农业科学. 2012(21)
[2]转基因动物研究应用及其存在问题[J]. 赵彦青,纪香,赵宝成. 今日畜牧兽医. 2011(S1)
[3]转基因动物新技术研究进展[J]. 罗庆苗,苗向阳,张瑞杰. 遗传. 2011(05)
[4]外源基因在转基因动物中遗传和表达的稳定性[J]. 孔庆然,刘忠华. 遗传. 2011(05)
[5]胚盘下腔注射法将外源质粒pEGFP-N1导入鸡胚的研究[J]. 孙研研,蒋斌,郑江霞,徐桂云,曲鲁江,杨宁. 农业生物技术学报. 2010(04)
[6]逆转录病毒转染胚盘细胞制备嵌合体鸡胚的研究[J]. 张秋婷,苗向阳,安铁洙. 中国农业科学. 2010(15)
[7]转基因动物研究进展及其应用[J]. 高瞻,唐红. 华西医学. 2009(12)
[8]转基因动物研究进展[J]. 李想,逍遥,张鑫,杨利国. 中国奶牛. 2009(12)
[9]转基因动物研究进展[J]. 张贺,王承利,王洋. 沈阳部队医药. 2008(05)
[10]转基因动物研究进展[J]. 张贺,王承利,王洋. 动物医学进展. 2008(07)
本文编号：3345893
【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校
【文章页数】：54 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
pEGFP-C2质粒载体PCR鉴定结果
图 2 质 粒 的 线性 化 - 4 :质 粒线 性化 后； 5 ： 质 粒 线性 化i g u re 2 Th e li n e a ri z a ti o n o f th e p la s mz e d p la s mi d ;5 : N e ga ti v e c o nt r o l w it h 质 粒 均 为线 性 结 构， 5 号孔 为线 ，最 上面 为 环 状 结构 。 从图 中胶 阻滞 实 验结 果 粒 室温 条 件下 共孵 育 20 分 钟测 。每 孔 中质 粒 的用 量为 4 微质 粒 与 脂质 体的 包 装最 佳 比例 是 糖 间 隙， 其 表 面带 有 正电 荷， 在， 在 进行 电 泳 时 DN A 将 不能 向 脂 质 体 用量 过 少 时， 就 不能 完全 粒 - 脂质 体 凝 胶阻 滞 试 验 来确 定
图 3 质 粒- 脂 质 体 凝胶 阻 滞 结果 ～ 4 ：包 装比 依次 为 1 ：2 . 5、 1： 2 、1 ： 1 . 5、 1 e 3 Th e re s u lt s o f ge l b lo c k a mo n g li p o s o me a n d ～ 4 ：P a c k in g is in o rd e r :1 ：2 . 5 、1 ：2 、1 ：1 .从 菌液 中 提取 纯化 后 的 未 加入 脂 质体 的 从脂 质 体 溢 出的 质 粒 DN A 逐渐 减少 ， 1 号 比例 大 小， 在比 例 为 1 : 2. 5 时 ，质 粒 不会 转 染实 验 。 及优 越 性 胞 膜， 是 由 脂 质双 分 子 层组 成 的， 磷 脂 分 一 种 囊状 物被 称 为 脂 质小 体 。阳 离子 脂
【参考文献】：
期刊论文
[1]转基因动物研究的技术思路[J]. 刘西梅,乔宪凤,张立苹,程妮,毕延震,李莉,肖红卫,华再东,华文君. 湖北农业科学. 2012(21)
[2]转基因动物研究应用及其存在问题[J]. 赵彦青,纪香,赵宝成. 今日畜牧兽医. 2011(S1)
[3]转基因动物新技术研究进展[J]. 罗庆苗,苗向阳,张瑞杰. 遗传. 2011(05)
[4]外源基因在转基因动物中遗传和表达的稳定性[J]. 孔庆然,刘忠华. 遗传. 2011(05)
[5]胚盘下腔注射法将外源质粒pEGFP-N1导入鸡胚的研究[J]. 孙研研,蒋斌,郑江霞,徐桂云,曲鲁江,杨宁. 农业生物技术学报. 2010(04)
[6]逆转录病毒转染胚盘细胞制备嵌合体鸡胚的研究[J]. 张秋婷,苗向阳,安铁洙. 中国农业科学. 2010(15)
[7]转基因动物研究进展及其应用[J]. 高瞻,唐红. 华西医学. 2009(12)
[8]转基因动物研究进展[J]. 李想,逍遥,张鑫,杨利国. 中国奶牛. 2009(12)
[9]转基因动物研究进展[J]. 张贺,王承利,王洋. 沈阳部队医药. 2008(05)
[10]转基因动物研究进展[J]. 张贺,王承利,王洋. 动物医学进展. 2008(07)
本文编号：3345893
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