乳酸片球菌的抗菌作用及其细菌素基因的克隆表达
发布时间：2021-08-16 16:15
本论文以内蒙古农业大学微生物实验室保存的Pediococcus acidilactici R-4（从日本处理有机废弃物中分离筛选）为研究对象,采用牛津杯法对Pediococcus acidilactici R-4培养液进行酸性产物及H2O2产物排除试验、蛋白酶水解试验、酸碱稳定性试验等认为该菌产生的抗菌物质可能为细菌素。为进一步探索Pediococcus acidilactici R-4的抑菌机理,从分子水平检测其片球菌素操纵子,本试验以提取的Pediococcus acidilactici R-4全基因组为模板,根据GenBank（M83924）发布的pediocin PA-1基因中PedA结构序列设计合成一对特异性引物,利用PCR技术从基因组DNA中扩增出目的片段,经回收纯化后将目的片段连接于pMD19-T载体上,并转化到E.coli DH5α感受态中。经验证筛选,对阳性克隆进行鉴定分析,克隆到pET-32a（+）表达载体转入E.coli BL21（DE3）感受态中,经过Amp+平皿筛选,质粒双酶切鉴定和菌落PCR两步验证,成功获得重组阳性质粒,利用IPTG诱导表达感受态E.col...
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２?Ｐｅｄｉｏｃｏｃｉｎ?ＰＡ－１操纵子结构基因图??Ｆｉｇ．２?Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ?ｇｅｎｅ?ｍａｐ?ｏｆ?Ｐｅｄｉｏｃｏｃｉｎ?ＰＡ－１??１．４．３?Ｉｌａ类乳酸菌素作用方式??
?内蒙古农业大学硕士学位论文?２５??图６酶敏感性试验结果图??Ｆｉｇ．６?Ｅｎｚｙｍｅ?ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ?ｔｅｓｔ?ｒｅｓｕｌｔ?ｇｒａｔｈ??ｌ．Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ?ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ?Ｒ－４培养液；２．胃蛋白酶处理；３．胰蛋白酶处理；４．对照??１．?Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ?ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ?Ｒ－４?ｍｅｄｉｕｍ；?２．?Ｐｅｐｓｉｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；?３．?Ｔｒｙｐｓｉｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；?４．??Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ??２．３．５?Ｒ－４培养液中细菌素对酸碱稳定性试验结果??将／Ｗ／ｋｏｅｃｗｓ?Ｒ－４培养液调至不同ｐＨ值处理，试验结果如图７??所示。可以看出，此细菌素在ｐＨ值从２？６的范围内对指示菌有抑制作用，表??明细菌素在此范围内具有较为稳定的酸碱稳定性。??４；＊－?２－．??图７细菌素酸碱稳定性试验??Ｆｉｇ．７?Ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ?ａｃｉｄ－ｂａｓｅ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｔｅｓｔ??ｌ．ｐＨ４培养液；２．ｐＨ６培养液；３．ｐＨ８培养液；４．ｐＨ１０培养液；５．ｐＨ１２培养液；??６．?ｐＨ２培养液??１．?ｐＨ４?ｍｅｄｉｕｍ；?２．?ｐＨ６?ｍｅｄｉｕｍ；?３．?ｐＨ８?ｍｅｄｉｕｍ；?４．?ｐＨ?１０?ｍｅｄｉｕｍ；?５．?ｐＨ?１２?ｍｅｄｉｕｍ；??６．?ｐＨ２?ｍｅｄｉｕｍ??
?内蒙古农业大学硕士学位论文?２５??图６酶敏感性试验结果图??Ｆｉｇ．６?Ｅｎｚｙｍｅ?ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ?ｔｅｓｔ?ｒｅｓｕｌｔ?ｇｒａｔｈ??ｌ．Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ?ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ?Ｒ－４培养液；２．胃蛋白酶处理；３．胰蛋白酶处理；４．对照??１．?Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ?ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ?Ｒ－４?ｍｅｄｉｕｍ；?２．?Ｐｅｐｓｉｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；?３．?Ｔｒｙｐｓｉｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；?４．??Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ??２．３．５?Ｒ－４培养液中细菌素对酸碱稳定性试验结果??将／Ｗ／ｋｏｅｃｗｓ?Ｒ－４培养液调至不同ｐＨ值处理，试验结果如图７??所示。可以看出，此细菌素在ｐＨ值从２？６的范围内对指示菌有抑制作用，表??明细菌素在此范围内具有较为稳定的酸碱稳定性。??４；＊－?２－．??图７细菌素酸碱稳定性试验??Ｆｉｇ．７?Ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ?ａｃｉｄ－ｂａｓｅ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｔｅｓｔ??ｌ．ｐＨ４培养液；２．ｐＨ６培养液；３．ｐＨ８培养液；４．ｐＨ１０培养液；５．ｐＨ１２培养液；??６．?ｐＨ２培养液??１．?ｐＨ４?ｍｅｄｉｕｍ；?２．?ｐＨ６?ｍｅｄｉｕｍ；?３．?ｐＨ８?ｍｅｄｉｕｍ；?４．?ｐＨ?１０?ｍｅｄｉｕｍ；?５．?ｐＨ?１２?ｍｅｄｉｕｍ；??６．?ｐＨ２?ｍｅｄｉｕｍ??
【参考文献】：
期刊论文
[1]乳酸菌的益生功能及其在畜牧生产中的应用[J]. 赵悦,王志跃,杨海明,李彦品,孙勇,薛金果. 饲料研究. 2016(15)
[2]乳酸菌在反刍动物应用中的研究进展[J]. 赵树平,高鹏飞,包维臣,李晶,崔景丽,张和平. 畜牧与兽医. 2015(03)
[3]大豆肽和乳酸菌素对蛋鸡生产性能、蛋品质及血液生化指标的影响[J]. 孙汝江,吕月琴,张日俊. 动物营养学报. 2012(08)
[4]益生菌制剂对早期断奶仔猪生长性能和免疫指标的影响[J]. 刘虎传,张敏红,冯京海,姜海龙,杨晓岚,姜礼文,陈燕. 动物营养学报. 2012(06)
[5]抗生素饲料添加剂在畜牧业生产中过度使用的危害及对策[J]. 张兆顺,窦宝棠,白应利,赵安彬. 陕西农业科学. 2012(03)
[6]乳酸菌素对肉鸡血清生化指标和抗氧化功能的影响[J]. 王全溪,林滉,贾洪强,张志霆,王长康. 动物营养学报. 2012(01)
[7]饲粮中添加复合益生菌对奶牛瘤胃发酵及纤维素酶活的影响[J]. 刘彩娟,孙满吉,孙金艳,吕文龙,刘薇,单安山,张永根. 动物营养学报. 2011(05)
[8]细菌素在动物疾病防治中的作用和机理研究进展[J]. 刘宝生,尚雅静,张日俊. 中国兽医科学. 2010(03)
[9]天然食品防腐剂乳酸菌素的研究[J]. 李霞,牟光庆. 食品工业科技. 2009(03)
[10]乳酸菌类细菌素的研究进展[J]. 黄现青,高晓平,韩庆功,崔艳红. 中国乳品工业. 2007(09)
硕士论文
[1]片球菌的分离鉴定及青贮接种剂的研制[D]. 隋鸿园.内蒙古农业大学 2013
[2]肠球菌属细菌素的筛选及其结构基因的表达[D]. 王涛.华中农业大学 2013
本文编号：3345993
【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２?Ｐｅｄｉｏｃｏｃｉｎ?ＰＡ－１操纵子结构基因图??Ｆｉｇ．２?Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ?ｇｅｎｅ?ｍａｐ?ｏｆ?Ｐｅｄｉｏｃｏｃｉｎ?ＰＡ－１??１．４．３?Ｉｌａ类乳酸菌素作用方式??
?内蒙古农业大学硕士学位论文?２５??图６酶敏感性试验结果图??Ｆｉｇ．６?Ｅｎｚｙｍｅ?ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ?ｔｅｓｔ?ｒｅｓｕｌｔ?ｇｒａｔｈ??ｌ．Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ?ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ?Ｒ－４培养液；２．胃蛋白酶处理；３．胰蛋白酶处理；４．对照??１．?Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ?ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ?Ｒ－４?ｍｅｄｉｕｍ；?２．?Ｐｅｐｓｉｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；?３．?Ｔｒｙｐｓｉｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；?４．??Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ??２．３．５?Ｒ－４培养液中细菌素对酸碱稳定性试验结果??将／Ｗ／ｋｏｅｃｗｓ?Ｒ－４培养液调至不同ｐＨ值处理，试验结果如图７??所示。可以看出，此细菌素在ｐＨ值从２？６的范围内对指示菌有抑制作用，表??明细菌素在此范围内具有较为稳定的酸碱稳定性。??４；＊－?２－．??图７细菌素酸碱稳定性试验??Ｆｉｇ．７?Ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ?ａｃｉｄ－ｂａｓｅ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｔｅｓｔ??ｌ．ｐＨ４培养液；２．ｐＨ６培养液；３．ｐＨ８培养液；４．ｐＨ１０培养液；５．ｐＨ１２培养液；??６．?ｐＨ２培养液??１．?ｐＨ４?ｍｅｄｉｕｍ；?２．?ｐＨ６?ｍｅｄｉｕｍ；?３．?ｐＨ８?ｍｅｄｉｕｍ；?４．?ｐＨ?１０?ｍｅｄｉｕｍ；?５．?ｐＨ?１２?ｍｅｄｉｕｍ；??６．?ｐＨ２?ｍｅｄｉｕｍ??
?内蒙古农业大学硕士学位论文?２５??图６酶敏感性试验结果图??Ｆｉｇ．６?Ｅｎｚｙｍｅ?ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ?ｔｅｓｔ?ｒｅｓｕｌｔ?ｇｒａｔｈ??ｌ．Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ?ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ?Ｒ－４培养液；２．胃蛋白酶处理；３．胰蛋白酶处理；４．对照??１．?Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ?ａｃｉｄｉｌａｃｔｉｃｉ?Ｒ－４?ｍｅｄｉｕｍ；?２．?Ｐｅｐｓｉｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；?３．?Ｔｒｙｐｓｉｎ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；?４．??Ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ??２．３．５?Ｒ－４培养液中细菌素对酸碱稳定性试验结果??将／Ｗ／ｋｏｅｃｗｓ?Ｒ－４培养液调至不同ｐＨ值处理，试验结果如图７??所示。可以看出，此细菌素在ｐＨ值从２？６的范围内对指示菌有抑制作用，表??明细菌素在此范围内具有较为稳定的酸碱稳定性。??４；＊－?２－．??图７细菌素酸碱稳定性试验??Ｆｉｇ．７?Ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｎ?ａｃｉｄ－ｂａｓｅ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｔｅｓｔ??ｌ．ｐＨ４培养液；２．ｐＨ６培养液；３．ｐＨ８培养液；４．ｐＨ１０培养液；５．ｐＨ１２培养液；??６．?ｐＨ２培养液??１．?ｐＨ４?ｍｅｄｉｕｍ；?２．?ｐＨ６?ｍｅｄｉｕｍ；?３．?ｐＨ８?ｍｅｄｉｕｍ；?４．?ｐＨ?１０?ｍｅｄｉｕｍ；?５．?ｐＨ?１２?ｍｅｄｉｕｍ；??６．?ｐＨ２?ｍｅｄｉｕｍ??
【参考文献】：
期刊论文
[1]乳酸菌的益生功能及其在畜牧生产中的应用[J]. 赵悦,王志跃,杨海明,李彦品,孙勇,薛金果. 饲料研究. 2016(15)
[2]乳酸菌在反刍动物应用中的研究进展[J]. 赵树平,高鹏飞,包维臣,李晶,崔景丽,张和平. 畜牧与兽医. 2015(03)
[3]大豆肽和乳酸菌素对蛋鸡生产性能、蛋品质及血液生化指标的影响[J]. 孙汝江,吕月琴,张日俊. 动物营养学报. 2012(08)
[4]益生菌制剂对早期断奶仔猪生长性能和免疫指标的影响[J]. 刘虎传,张敏红,冯京海,姜海龙,杨晓岚,姜礼文,陈燕. 动物营养学报. 2012(06)
[5]抗生素饲料添加剂在畜牧业生产中过度使用的危害及对策[J]. 张兆顺,窦宝棠,白应利,赵安彬. 陕西农业科学. 2012(03)
[6]乳酸菌素对肉鸡血清生化指标和抗氧化功能的影响[J]. 王全溪,林滉,贾洪强,张志霆,王长康. 动物营养学报. 2012(01)
[7]饲粮中添加复合益生菌对奶牛瘤胃发酵及纤维素酶活的影响[J]. 刘彩娟,孙满吉,孙金艳,吕文龙,刘薇,单安山,张永根. 动物营养学报. 2011(05)
[8]细菌素在动物疾病防治中的作用和机理研究进展[J]. 刘宝生,尚雅静,张日俊. 中国兽医科学. 2010(03)
[9]天然食品防腐剂乳酸菌素的研究[J]. 李霞,牟光庆. 食品工业科技. 2009(03)
[10]乳酸菌类细菌素的研究进展[J]. 黄现青,高晓平,韩庆功,崔艳红. 中国乳品工业. 2007(09)
硕士论文
[1]片球菌的分离鉴定及青贮接种剂的研制[D]. 隋鸿园.内蒙古农业大学 2013
[2]肠球菌属细菌素的筛选及其结构基因的表达[D]. 王涛.华中农业大学 2013
本文编号：3345993
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3345993.html
