禽网状内皮组织增生症病毒抗原快速检测试纸条的研制及应用

发布时间：2021-08-17 02:55

　　禽网状内皮组织增生症（Reticuloendotheliosis）是由C型逆转录病毒禽网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus,REV）引起的一系列症状的总称,主要包括矮小综合征、急性网状细胞瘤和慢性组织肿瘤;其病原是目前己知的家禽中第三种肿瘤病病原。目前用于REV检测的方法虽然灵敏度高、准确性强,但耗时长,需要专业人员和专业设备,基层推广条件不理想。为此,需要一种简便快捷的检测方法来检测REV。本论文设计研制了一种以检测REV主要免疫原性蛋白p30的两种单抗,REVp30-2C8、REVp30-5G6为基础的免疫胶体金层析试纸条,具有良好的特异性,灵敏度和ELISA试剂盒相当,且快速、灵敏、准确,5-15min即可出结果;检测样本涵盖肛拭子、喉拭子等,采样方便,不需专业设备;成本低廉且具有良好的基层推广价值,在生产实际中将产生重要作用。1.两种单克隆抗体与胶体金结合条件的选择本研究参考Frens控制还原剂量以控制胶体金粒径大小的方法,成功制备了粒径为15nm、30nm、40nm的胶体金,通过肉眼观察,透射电镜,胶体金试验的方法鉴定其适用性。而后,... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?ＲＥＶ病毒结构??Ｆｉｇ．ｌ?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?Ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓ?ｖｉｒｕｓ??

图２?ＲＥＶ基因组??Ｆｉｇ．２?Ｇｅｎｏｍｅ?ｏｆ?Ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓｉｓ?ｖｉｒｕｓ??根据ＲＥＶ病毒的复制特点，病毒被分为完全复制型和缺陷型两种病毒群［１８］。完全复??制型基因组全长约９．０ｋｂ［１９］，两端为长末端重复序列（ｌｏｎｇ?ｔｅｒｍｉｎａｌ?ｒｅｐｅａｔ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ，?ＬＴＲ），??从５’端到３’端含有ＰＢＳ引物结合区、ｇａｇ、ｐｏ／和ｅ？ｖ等结构基因卿。而ＲＥＶ－Ｔ株作为缺??陷型（不完全复制型）的基因组长度仅约５．７ｋｂｔ２ｌｌ?ｇａｇ－ｐｏ／部分大段缺失，部分少量??缺失因此需要辅助病毒ＲＥＶ－Ａ的参与才能进行病毒复制％。缺陷型ＲＥＶ病毒在ｅ？ｖ??区含有一个大小约〇．８￣１．５ｋｂ的替代片段，称为Ｖ－ｒｅｌ基因［２４］，其编码产物很可能是Ｔ株的??致瘤性蛋白，具有转化宿主淋巴细胞的能力。其他完全复制型ＲＥＶ基因组不包含Ｖ－ｒｅｌ片??段，故而只有缺陷型病毒才会引起急性肿瘤诱发大规模死亡［２５］。??１．４蛋白组成??

图３双电子层环绕的胶体金颗粒??Ｆｉｇ．３?Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ?ｇｏｌｄ?ｐａｒｔｉｃｌｅ?ｗｒａｐｐｅｄ?ｂｙ?ｄｏｕｂｌｅ?ｅｌｅｃｔｒｏｎ?ｌａｙｅｒ??记过程即标记物蛋白质等与胶体金颗粒发生吸附的过程。体结合过程中存在三种不同的作用力，静电引力、疏水颗粒与蛋白质上的正电位氨基发生反应，蛋白质中的半生成配位键。第二步蛋白质疏水吸附到金颗粒表面。胶蛋白质亲水基团与疏水性胶体相互吸引结合使其达到配荷引力降低。当ｐＨ值调节至适当界限时，蛋白质电荷为因静电引力聚集，在蛋白质亲水作用和胶体金颗粒疏水质结合。蛋白质等大分子物质与胶体金的结合主要是物。结合后需加入包括牛血清蛋白（ＢＳＡ）、聚乙二醇（Ｐ未被占据的位点以减少非特异性反应，稳定胶体金悬胶


本文编号：3346916