H7亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备及胶体金免疫层析试纸条的研制

发布时间：2021-08-17 19:47

　　禽流感（avian influenza, AI）是由A型流感病毒（AIV）感染家禽后引起的各种综合征。A型流感病毒目前有17种血凝素（HA）和10种神经氨酸酶（NA）,根据HA和NA分为不同的亚型。2013年2月,中国出现了一种由H7N9亚型禽流感病毒引起的疫情,共造成几十人死亡,对人类健康和养禽业构成极大威胁。由于该病传播迅速,确诊方法繁琐和确诊时间长,因此,研究对该病的快速诊断方法显得尤为重要和急迫。1.H7亚型高致病性禽流感病毒单抗的制备本研究通过超速离心法纯化的H7N9亚型AIV用甲醛灭活,作为免疫抗原免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,制备阳性血清；同时将纯化的病毒作为包被抗原包被酶标板,建立间接ELISA检测方法用于单抗筛选。通过试验优化建立间接ELISA方法的检测条件。抗原最适包被浓度为1：1600,最佳包被条件为37℃作用1h后4℃过夜,抗原最佳封闭时间为40mmin；血清最佳稀释度为1：400,血清作用时间为30min；酶标二抗最佳稀释度为1：10000,作用时间为2h;底物显色时问为15min.通过皮下注射法连续三次免疫BALB/c鼠,免疫间隔时间为14天,三免后10天... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：87 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略语表
第一篇 文献综述
    第一章 禽流感病毒的研究进展
        1 禽流感简述
        2 禽流感病毒的形态结构及其基因组
            2.1 禽流感病毒的形态结构
            2.2 流感病毒致病性的分子基础
        3 禽流感流行病学
            3.1 禽流感流行情况
            3.2 H7N9亚型禽流感流行情况
        4 禽流感的诊断与防治
            4.1 病原学诊断方法
            4.2 禽流感的防治
        5 研究目的与意义
        参考文献
    第二章 单克隆抗体的研究进展
        1 单克隆抗体的制备原理
        2 单克隆抗体的研究进展
            2.1 鼠源性抗体
            2.2 嵌合抗体
            2.3 人源化抗体
            2.4 人源性抗体
        3 单克隆抗体的应用
            3.1 疾病的诊断和防治
            3.2 疫苗的生产
            3.3 免疫学的基础研究
            3.4 抗原纯化方面
        4 单克隆抗体在禽流感中的应用
        参考文献
第二篇 试验部分
    第三章 H7亚型高致病性禽流感病毒单抗的制备
        摘要
        1 材料
            1.1 毒株
            1.2 SPF鸡胚
            1.3 动物及细胞
            1.4 试剂
            1.5 主要仪器与耗材
        2 方法
            2.1 病毒的制备
            2.2 病毒的纯化
            2.3 动物免疫
            2.4 间接ELISA方法的建立
            2.5 单克隆抗体的制备
            2.6 细胞的冻存和复苏
            2.7 单抗的大量制备
            2.8 单抗的鉴定
        3 结果
            3.1 纯化病毒蛋白含量的测定
            3.2 建立间接ELISA方法
            3.3 杂交瘤细胞株的建立
            3.4 细胞的复苏
            3.5 单克隆抗体的鉴定
        4 讨论
            4.1 制备抗原的方法
            4.2 影响细胞融合的因素
            4.3 阳性杂交瘤细胞的筛选
            4.4 单克隆抗体特异性鉴定
            4.5 单克隆抗体在检测禽流感病毒中的应用
        参考文献
        ABSTRACT
    第四章 H7型禽流感病毒单克隆抗体胶体金免疫层析检测试纸条的研制
        摘要
        1 材料
            1.1 毒株
            1.2 试验试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 胶体金免疫层析试纸条的制备材料
        2 方法
            2.1 单克隆抗体的制备
            2.2 腹水的纯化
            2.3 兔抗H7型禽流感病毒多克隆抗体的制备
            2.4 免疫胶体金的制备
            2.5 胶体金免疫层析检测试纸条的初步组装与使用
            2.6 胶体金免疫层析试纸条的应用
        3 结果
            3.1 5D_2的纯化
            3.2 兔抗H7亚型禽流感病毒多克隆血清抗体的制备
            3.3 确定胶体金标记抗体的相关条件
            3.4 胶体金免疫层析试纸条相关条件的探索
            3.5 胶体金免疫层析试纸条的鉴定
        4 讨论
            4.1 单抗腹水及多抗的纯化
            4.2 胶体金免疫层析检测试纸条的研制
        参考文献
        ABSTRACT
全文小结
附录
致谢
攻读硕士学位期间发表论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]H9亚型鸭源禽流感病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR快速检测方法的建立[J]. 万春和,林甦,施少华,林秋敏,陈红梅,程龙飞,傅光华,林芳,林建生,黄瑜.  福建农业学报. 2010(04)
[2]胶体金试纸条检测H9亚型禽流感病毒的研究[J]. 彭伏虎,王政,张进良,张文通,张展英,胡思顺,肖运才,毕丁仁.  畜牧兽医学报. 2008(08)
[3]胶体金免疫层析法用于禽流感亚型诊断[J]. 吴华莉,李震,钟诚,刘惠莉,周智爱,周宗清,黄路生.  上海畜牧兽医通讯. 2004(05)
[4]鸡传染性法氏囊病快速诊断试纸条的研制及特性测定[J]. 张改平,李学伍,杨艳艳,邓瑞广,李青梅.  畜牧兽医学报. 2004(01)
[5]犬细小病毒病免疫胶体金诊断技术的研究[J]. 王中力,宋晓晖,陈西召,陈国胜.  中国预防兽医学报. 2004(01)
[6]禽流感诊断研究进展[J]. 宋晓晖,王中力,陈西钊.  中国动物检疫. 2003(11)
[7]间接ELISA法检测流感病毒IgG抗体[J]. 李静.  湖北预防医学杂志. 2003(01)
[8]禽流感的历史和公共卫生意义[J]. 郑腾,陈枝华.  生物学通报. 2002(04)
[9]禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究[J]. 李海燕,于康震,辛晓光,邓国华.  中国预防兽医学报. 2000(03)
[10]间接ELISA、HI及AGP检测鸡血清中抗AIV抗体的敏感性比较[J]. 林祥梅,赵增连,田国斌,陈万芳,陈溥言,于康震.  中国兽医学报. 1998(05)



本文编号：3348382