牛病毒性腹泻病毒抗体间接ELISA方法的建立

发布时间：2021-08-18 19:38

　　本研究为建立牛病毒性腹泻病毒（BVDV）抗体间接ELISA方法,根据GenBank公布的BVDVE2基因序列,利用DNAstar等软件进行生物信息学分析,截取抗原性和亲水性较高的序列,将其进行稀有密码子优化,串联信号肽序列后送公司合成并连接到原核表达载体pET-32a（+）,构建重组质粒pET-32a-Opti-E2,鉴定正确后,转化至E.coli BL21（DE3）宿主菌,IPTG 诱导表达,经 SDS-PAGE 和 Western Blot 分析,成功获得大小为43 kDa BVDV E2基因的可溶性蛋白。应用可溶性表达的E2蛋白作为包被抗原,建立并优化了检测BVDV抗体的间接ELISA方法,命名为Opti-E2-ELISA。采用受试者工作特征曲线方法对203份血清的S/P值进行分析,确定Opti-E2-ELISA的阴阳性临界值为0.21。当S/P值为0.21时,此方法的敏感性为96.97%,特异性为97.65%。用Opti-E2-ELISA方法检测牛传染性鼻气管炎病毒阳性血清、牛口蹄疫病毒阳性血清、布鲁菌阳性血清、牛副结核分支杆菌阳性血清,结果均为阴性,表明此方法特异性良好。批间... 

【文章来源】：内蒙古农业大学内蒙古自治区

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１?ＢＶＤＶ基因组结构意图??Ｆｉ．?１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃｉａｒａｍ?ｏｆ?ＢＶＤＶｅｎｏｍｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ??

2蛋白的亲水性、杭原性和表面可及性的预测

图４重组表达质粒双酶切鉴定??

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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[7]牛病毒性腹泻黏膜病实用诊断方法的建立[D]. 王研.西南民族大学 2013
[8]牛病毒性腹泻病毒E2蛋白和NS3蛋白单克隆抗体的制备及鉴定[D]. 聂明非.东北农业大学 2010
[9]牛病毒性腹泻病毒重组E2蛋白多克隆抗体制备及间接ELISA方法的建立与应用[D]. 高欲燃.东北农业大学 2010
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本文编号：3350503