东北虎源细小病毒间接ELISA方法的建立及FPV对凋亡通路的影响
发布时间：2021-08-19 21:59
东北虎源细小病毒是由猫泛白细胞减少症病毒（Feline panleucopenia virus,FPV）引起的一种急性和致死性极高的传染病。又称猫泛白细胞减少症、猫瘟热病毒、猫细小病毒、猫传染性肠炎病毒。在自然条件下,可感染熊、虎、水貂、豹等多种食肉类动物,该病发病过程急、患病过程短、传染性和死亡率较高。FPV的爆发在很大程度上对特种经济动物以及野生动物造成威胁,因此控制FPV在我国的流行、诊断和预防具有重要的意义本研究以黑龙江省某虎林园的东北虎粪便为研究对象,该虎具有出血性肠炎,精神萎靡等症状。通过病毒分离鉴定、动物回归试验及分子生物学检测等方法,证明东北虎的发病原是东北虎源细小病毒,命名为FPV-HER-NEFU。细小病毒NS1蛋白在病毒的复制和转录过程中起重要作用。研究NS1基因对细小病毒的生物学特性及诊断预防等方面研究具有指导意义。本研究对分离的东北虎源细小病毒NS1全长基因进行克隆,并对其编码的蛋白进行生物信息学分析和构建分子遗传进化树。成功扩增2007bp靶基因并连接到表达载体pGEX-6P-1中以构建重组表达载体pGEX-FPV-NS1。将阳性重组质粒转化到大肠杆菌感受态...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１细小病毒病毒粒子立体模式图??Ｆｉｇ．?１－１?３Ｄ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ?ｖｉｒｉｏｎ??
?囊Ｉ??图１－１细小病毒病毒粒子立体模式图??Ｆｉｇ．?１－１?３Ｄ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ?ｖｉｒｉｏｎ??１．１．２细小病毒的培养特性及基因组结构??ＦＰＶ可以在组织细胞中增殖，例如幼猫的脾、心、肾、睾丸、肺、肾上腺、肠、骨??骼和淋巴结等。它也可用于Ｆ８１猫肾传代细胞、ＣＲＦＫ猫肾传代细胞、ＮＬＦＫ猫肾传代??细胞等％?１５１。与其它细小病毒一样，使用传代培养的方法进行分离病毒［１６１。细小病毒??是自主复制单股线性ＤＮＡ病毒，ＯＲＦ?ＮＳ和ＯＲＦ?Ｓ主要具有两个开放性阅读框??（ＯＲＦ），其基因组中含有两个启动子，可以启动结构蛋白（ＶＰ１和ＶＰ２）和非结构??蛋白（ＮＳ１和ＮＳ２）编码基因进行转录［１７，１８］。是基因组的两个主要的开放阅读框??ＯＲＦ。两个ＯＲＦ间隔７ｂｐ。ＯＲＦ?ＮＳ编码非结构蛋白，主要参与基因组复制和转录。??ＯＲＦ?Ｓ编码病毒的结构蛋白，其参与病毒体的组装并构成病毒［１９’２（）］。??ｒｖ?ｐａ??ｖ?ｒｒ?（ｒ＾??ＮＳｌ?＆?ＨＳ２??—＾—??Ｌ
Ｉ要求较严格，需要设立阴阳性对照，容易出现假阳性的情况，鉴定ＰＣＲ产物是否正确。在实验过程中需要规范的操作，ＰＣＲ此在很大程度上限制了其在临床兽医的推广应用。??亡的研究进展??凋亡的概述??亡是程序性细胞死亡（ＰＣＤ）过程，其中细胞在特定的内源和基因调节。细胞凋亡的特征在于细胞大小减少，与周围的细胞，线粒体膜电位消失，通透性改变，细胞质浓缩，细胞膜和解；可以观察到细胞膜有囊泡形成，最终可以观察到凋亡细胞亡是严格控制物种中高度保守的基因的过程，例如半胱天冬酶ｙｃ致癌基因和肿瘤抑制基因ｐ５３｜Ｗ］。随着分子生物学技术的发过程，但细胞凋亡的确切机制尚不完全清楚。凋亡过程的紊乱有关，如肿瘤，自身免疫性疾病，病毒感染等［６４，６５］。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]猫杯状病毒引起细胞凋亡的信号转导通路研究进展[J]. 崔占鼎,郭衍冰,李登亮,孙明洁,赵涵,张雪竹,张颖,胡桂学. 病毒学报. 2019(04)
[2]Bcl-2蛋白家族调节凋亡和自噬信号通路的研究进展[J]. 许国平,杨鹏,祁宏. 中国细胞生物学学报. 2019(06)
[3]东北三省圈养东北虎重要病毒性传染病血清学调查与分析[J]. 王海军,王开,李元果,国娇,胡桂学,高玉伟,夏咸柱. 吉林农业大学学报. 2017(05)
[4]重组原核表达载体pGEX6P1-Osx的构建与表达[J]. 王锋,陈硕,王玮. 福建医科大学学报. 2015(03)
[5]人细小病毒B19 IgM抗体间接ELISA检测方法的初步建立[J]. 凌辉生,储迅涛,曾敏霞. 检验医学与临床. 2014(05)
[6]猫细小病毒的分离与鉴定[J]. 刘碧涛,任常宝,张晓战,许冬蕾,郑良焰,唐兆新. 动物医学进展. 2013(09)
[7]猫细小病毒的分离与鉴定[J]. 刘明慧,石践,单振振,袁宝,任文陟. 吉林畜牧兽医. 2008(10)
[8]猫泛白细胞减少症病毒的研究进展[J]. 亢文华,赵凤龙,郝霖雨,潘春刚. 中国畜牧兽医. 2008(09)
[9]圈养东北虎FPV感染情况的初步调查与研究[J]. 刘丹,于亚丽,华育平,王立刚,柴洪亮,周明,张彦龙,王玮. 野生动物. 2008(04)
[10]猫泛白细胞减少症病毒的分离与鉴定[J]. 周珍辉,陈万荣,付少才,周育森,向双云,曹授俊. 中国兽医杂志. 2008(06)
博士论文
[1]肉食动物细小病毒流行株分子特征与致病性分析[D]. 王建科.中国农业科学院 2016
[2]虎源猫泛白细胞减少症病毒VP2蛋白的原核表达及应用研究[D]. 田丽红.东北林业大学 2010
[3]猫泛白细胞减少症病毒VP2基因遗传进化及其重组蛋白免疫原性研究[D]. 杨松涛.吉林大学 2006
硕士论文
[1]犬细小病毒VP2蛋白的原核表达及其形成病毒样颗粒的免疫原性研究[D]. 南靓靓.西北农林科技大学 2018
[2]水貂源新城疫病毒的分离鉴定及致病性研究[D]. 孙潇.东北林业大学 2018
[3]一株FPV-GZ01猫细小病毒的分离鉴定与遗传进化分析及对猫的致病性研究[D]. 洪马林.华南农业大学 2016
[4]猪细小病毒诱导ST细胞凋亡信号转导通路的研究[D]. 相海苓.西北农林科技大学 2015
[5]重组杆状病毒介导的猪博卡病毒VP2蛋白的表达及其免疫原性的研究[D]. 马俊.华中农业大学 2013
[6]貉细小病毒分离鉴定及免疫原性研究[D]. 康洪涛.中国农业科学院 2012
[7]犬细小病毒NS1非结构蛋白诱导宿主细胞凋亡的研究[D]. 潘红丽.河北农业大学 2012
[8]藏獒源犬细小病毒的分离鉴定及其VP2基因序列分析[D]. 梁璐琪.四川农业大学 2012
[9]水貂肠炎细小病毒NS1基因的真核表达与生物学特性分析[D]. 杨莘.中国农业科学院 2011
[10]鹅细小病毒NS基因PCR和单抗竞争ELISA检测方法的建立及应用[D]. 王倩.东北农业大学 2011
本文编号：3352219
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－１细小病毒病毒粒子立体模式图??Ｆｉｇ．?１－１?３Ｄ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ?ｖｉｒｉｏｎ??
?囊Ｉ??图１－１细小病毒病毒粒子立体模式图??Ｆｉｇ．?１－１?３Ｄ?ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｐａｒｖｏｖｉｒｕｓ?ｖｉｒｉｏｎ??１．１．２细小病毒的培养特性及基因组结构??ＦＰＶ可以在组织细胞中增殖，例如幼猫的脾、心、肾、睾丸、肺、肾上腺、肠、骨??骼和淋巴结等。它也可用于Ｆ８１猫肾传代细胞、ＣＲＦＫ猫肾传代细胞、ＮＬＦＫ猫肾传代??细胞等％?１５１。与其它细小病毒一样，使用传代培养的方法进行分离病毒［１６１。细小病毒??是自主复制单股线性ＤＮＡ病毒，ＯＲＦ?ＮＳ和ＯＲＦ?Ｓ主要具有两个开放性阅读框??（ＯＲＦ），其基因组中含有两个启动子，可以启动结构蛋白（ＶＰ１和ＶＰ２）和非结构??蛋白（ＮＳ１和ＮＳ２）编码基因进行转录［１７，１８］。是基因组的两个主要的开放阅读框??ＯＲＦ。两个ＯＲＦ间隔７ｂｐ。ＯＲＦ?ＮＳ编码非结构蛋白，主要参与基因组复制和转录。??ＯＲＦ?Ｓ编码病毒的结构蛋白，其参与病毒体的组装并构成病毒［１９’２（）］。??ｒｖ?ｐａ??ｖ?ｒｒ?（ｒ＾??ＮＳｌ?＆?ＨＳ２??—＾—??Ｌ
Ｉ要求较严格，需要设立阴阳性对照，容易出现假阳性的情况，鉴定ＰＣＲ产物是否正确。在实验过程中需要规范的操作，ＰＣＲ此在很大程度上限制了其在临床兽医的推广应用。??亡的研究进展??凋亡的概述??亡是程序性细胞死亡（ＰＣＤ）过程，其中细胞在特定的内源和基因调节。细胞凋亡的特征在于细胞大小减少，与周围的细胞，线粒体膜电位消失，通透性改变，细胞质浓缩，细胞膜和解；可以观察到细胞膜有囊泡形成，最终可以观察到凋亡细胞亡是严格控制物种中高度保守的基因的过程，例如半胱天冬酶ｙｃ致癌基因和肿瘤抑制基因ｐ５３｜Ｗ］。随着分子生物学技术的发过程，但细胞凋亡的确切机制尚不完全清楚。凋亡过程的紊乱有关，如肿瘤，自身免疫性疾病，病毒感染等［６４，６５］。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]猫杯状病毒引起细胞凋亡的信号转导通路研究进展[J]. 崔占鼎,郭衍冰,李登亮,孙明洁,赵涵,张雪竹,张颖,胡桂学. 病毒学报. 2019(04)
[2]Bcl-2蛋白家族调节凋亡和自噬信号通路的研究进展[J]. 许国平,杨鹏,祁宏. 中国细胞生物学学报. 2019(06)
[3]东北三省圈养东北虎重要病毒性传染病血清学调查与分析[J]. 王海军,王开,李元果,国娇,胡桂学,高玉伟,夏咸柱. 吉林农业大学学报. 2017(05)
[4]重组原核表达载体pGEX6P1-Osx的构建与表达[J]. 王锋,陈硕,王玮. 福建医科大学学报. 2015(03)
[5]人细小病毒B19 IgM抗体间接ELISA检测方法的初步建立[J]. 凌辉生,储迅涛,曾敏霞. 检验医学与临床. 2014(05)
[6]猫细小病毒的分离与鉴定[J]. 刘碧涛,任常宝,张晓战,许冬蕾,郑良焰,唐兆新. 动物医学进展. 2013(09)
[7]猫细小病毒的分离与鉴定[J]. 刘明慧,石践,单振振,袁宝,任文陟. 吉林畜牧兽医. 2008(10)
[8]猫泛白细胞减少症病毒的研究进展[J]. 亢文华,赵凤龙,郝霖雨,潘春刚. 中国畜牧兽医. 2008(09)
[9]圈养东北虎FPV感染情况的初步调查与研究[J]. 刘丹,于亚丽,华育平,王立刚,柴洪亮,周明,张彦龙,王玮. 野生动物. 2008(04)
[10]猫泛白细胞减少症病毒的分离与鉴定[J]. 周珍辉,陈万荣,付少才,周育森,向双云,曹授俊. 中国兽医杂志. 2008(06)
博士论文
[1]肉食动物细小病毒流行株分子特征与致病性分析[D]. 王建科.中国农业科学院 2016
[2]虎源猫泛白细胞减少症病毒VP2蛋白的原核表达及应用研究[D]. 田丽红.东北林业大学 2010
[3]猫泛白细胞减少症病毒VP2基因遗传进化及其重组蛋白免疫原性研究[D]. 杨松涛.吉林大学 2006
硕士论文
[1]犬细小病毒VP2蛋白的原核表达及其形成病毒样颗粒的免疫原性研究[D]. 南靓靓.西北农林科技大学 2018
[2]水貂源新城疫病毒的分离鉴定及致病性研究[D]. 孙潇.东北林业大学 2018
[3]一株FPV-GZ01猫细小病毒的分离鉴定与遗传进化分析及对猫的致病性研究[D]. 洪马林.华南农业大学 2016
[4]猪细小病毒诱导ST细胞凋亡信号转导通路的研究[D]. 相海苓.西北农林科技大学 2015
[5]重组杆状病毒介导的猪博卡病毒VP2蛋白的表达及其免疫原性的研究[D]. 马俊.华中农业大学 2013
[6]貉细小病毒分离鉴定及免疫原性研究[D]. 康洪涛.中国农业科学院 2012
[7]犬细小病毒NS1非结构蛋白诱导宿主细胞凋亡的研究[D]. 潘红丽.河北农业大学 2012
[8]藏獒源犬细小病毒的分离鉴定及其VP2基因序列分析[D]. 梁璐琪.四川农业大学 2012
[9]水貂肠炎细小病毒NS1基因的真核表达与生物学特性分析[D]. 杨莘.中国农业科学院 2011
[10]鹅细小病毒NS基因PCR和单抗竞争ELISA检测方法的建立及应用[D]. 王倩.东北农业大学 2011
本文编号：3352219
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