REV感染对SPF雏鸡免疫器官细胞凋亡及细胞增殖相关因子表达的影响
发布时间：2021-08-21 13:53
由于禽网状内皮组织增生病病毒（REV）感染导致的免疫抑制特性,现今禽网状内皮组织增生病（RE）对禽养殖业仍造成较大的危害。为了有效降低REV对养禽业的危害,迫切需要了解REV导致雏鸡免疫抑制的详细机制。本研究以1日龄SPF雏鸡为研究对象,将实验动物随机分为REV感染组和对照组。其中REV感染组的1日龄雏鸡于腹腔注射500μL的REV病毒稀释液,对照雏鸡腹腔注射500μL的灭菌生理盐水,于感染后7、14、21、28、35d取材。分别应用PI单染和Anexin V-FITC/PI双染的方法检测雏鸡免疫器官中淋巴细胞周期和细胞凋亡的动态变化、应用CCK8方法检测免疫器官中淋巴细胞增殖功能变化、应用RT-PCR技术检测REV感染后免疫器官中REV拷贝数的动态改变和Cyclin D1、Cyclin E、CDK2、CDK4 mRNA表达水平的变化、应用Western Blot方法检测Cyclin D1、Cyclin E蛋白含量的动态变化。为REV免疫致病机制的阐明和防治（制）提供了重要参考依据,主要结果如下:（1）1日龄SPF雏鸡感染REV后7-28 d,其胸腺中检测到了病毒;脾脏中在在整个实验的...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞周期中Cyclin与CDK在不同时相的相互作用（引自百度图片）
该结构也叫周期素盒(cyclin box)，该部位能够结合 CDKs，并激活其发挥作用。该蛋白的 C 端也含有一个 PEST 序列，该序列与蛋白降解密切相关，还有研究发现，在 Cyclin E 第380 位苏氨酸可发生自身磷酸化，能够使 Cyclin E 发生降解，这一残基的磷酸化与泛素化路径处理有关。因此，Cyclin E 能通过上述两种方式降解。Cyclin E 在 G1 中期合成，细胞周期G1 期向 S 期过渡时含量最高，当进入 S 期后 Cyclin E 会被迅速降解，其含量急剧降低至消失[84]。（2）Cyclin E-CDK2 与增殖异常的关系 细胞异常增殖是肿瘤发生的重要前提，是由细胞周期调控相关蛋白表达异常所致。主要表现在细胞周期各个阶段的变化及 Cyclins、CDKs和 CKI 三者表达异常。随着人们对细胞周期相关研究的不断深入，对 Cyclin E 和 CDK2 认知更深，认为 Cyclin E 表达失调，使细胞周期中染色体稳定性变弱，从而造成细胞增殖异常，进而引起肿瘤的发生[85]。Cyclin E-CDK2 也是作用于 G1/S 期，与 Cyclin D-CDK4/6 具有协同作用，二者形成了对 Rb 蛋白磷酸化的阳性反馈回路，共同促进细胞由 G1 到 S 期的转换，因此，故 Cyclin E-CDK2 表达异常可使细胞的 G1-S 期调控失调，导致细胞增殖异常。有研究表明，通过 ATP 分子抑制剂来抑制 CDK2 活性，使 CDK2 和 Cyclin E 分离来降低 CDK2-CyclinE 复合物的活性水平，可阻止细胞进入 S 期[86]。据报道，在人结肠癌中，细胞周期蛋白 E和 CDK2 过度表达与人结肠癌的发展有密切联系[85]。因此，Cyclin E-CDK2 复合物的不正常表达与增殖异常密切相关。
EV 感染 SPF 雏鸡胸腺淋巴细胞凋亡变化 感染 1 日龄 SPF 雏鸡后 14-21 d，其胸腺淋巴细胞凋亡数量显著（P<0.0.01）高于对照雏鸡，其余未见统计学差异（P>0.05）（表 3-1，图 3-1 和表 3-1 REV 感染 SPF 雏鸡后第 14 和 21 d 胸腺淋巴细胞凋亡百分比变3-1 Changes of apoptosis percentage in thymus lymphocytes of SPF chicks infeREV at 14 and 21 days组别 groups C I14 1.82±0.23 6.45±0.62*21 2.97±0.37 5.67±0.46*C—对照组；I—REV 感染组*表示差异显著，P<0.05；**表示差异极显著，P<0.01；无标注表示差异不显著，P>C—control group; I—group infected with REVThe values with asterisk differ significantly(with single asterisk, P<0.05) or very significansterisk, P<0.01), and no significant(with no asterisk, P>0.05), the following is same as here
【参考文献】：
期刊论文
[1]镉对鸡胚成纤维细胞增殖和凋亡的影响[J]. 吴汉东,王会. 畜牧与兽医. 2018(01)
[2]网状内皮组织增殖病病毒免疫抑制状态下禽波氏菌对雏鸡致病性增强[J]. 杨萍萍,袁朋,魏凯,胡莉萍,朱瑞良. 畜牧兽医学报. 2017(08)
[3]高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒依赖Caspase途径诱导仔猪胸腺细胞凋亡[J]. 张冲,赵识非,王刚,于颖,刘永刚,常亚飞,涂亚斌,王淑杰,姜成刚,蔡雪辉. 中国预防兽医学报. 2016(12)
[4]网状内皮组织增生症病毒改良型LAMP检测方法的建立[J]. 曾婷婷,谢芝勋,谢丽基,刘加波,庞耀珊,范晴,罗思思,邓显文,谢志勤. 动物医学进展. 2013(08)
[5]传染性法氏囊病毒对SPF雏鸡免疫器官细胞凋亡及bcl-2mRNA表达的影响[J]. 佟美姣,高雪丽,李博韬,郑世民. 畜牧兽医学报. 2013(04)
[6]病毒感染对细胞周期调控影响的研究进展[J]. 周雪红,李凯. 微生物学免疫学进展. 2012(06)
[7]细胞周期中G1/S检验点的研究进展[J]. 舒丽娟. 中国医学工程. 2012(07)
[8]禽网状内皮组织增生病病毒套式PCR检测方法的建立[J]. 毕研丽,孙翠平,王金良,郭广君,吕素芳,苗立中,沈志强. 畜牧与兽医. 2011(12)
[9]Cyclin D1与细胞周期调控[J]. 卢梦玲,闫超,赖多,徐汉虹. 生物技术通报. 2011(10)
[10]禽网状内皮增生病毒囊膜基因gp90的克隆表达及ELISA方法的初步建立[J]. 余冲,黄勇,田明星,石敏,李敏,赵芳芳. 浙江大学学报(农业与生命科学版). 2011(04)
博士论文
[1]REV感染对SPF雏鸡miRNA及其靶基因mRNA表达的影响[D]. 于志强.东北农业大学 2017
[2]猪圆环病毒2型感染诱导PK-15细胞内质网应激与凋亡的机制研究[D]. 周莹珊.浙江大学 2016
[3]宿主波形蛋白在禽网状内皮组织增生病病毒感染中的作用机制研究[D]. 胡峰.中国农业科学院 2015
[4]禽网状内皮组织增生病基因工程亚单位疫苗及DNA疫苗的研制[D]. 李凯.中国农业科学院 2014
[5]黄芪多糖对人红白血病K562细胞增殖和凋亡的影响及机制[D]. 李超.南方医科大学 2014
[6]CyclinD1通过激活NDR调控细胞周期的机制研究[D]. 杜朝阳.中国科学技术大学 2013
[7]禽网状内皮组织增生病病毒与J-亚群白血病病毒的致病性及其疫苗研究[D]. 孙淑红.山东农业大学 2007
硕士论文
[1]丹东地区鸡传染性贫血病毒的分离鉴定及VP3蛋白促凋亡作用的研究[D]. 蔡静.沈阳农业大学 2017
[2]茶树油提取物粉对大小鼠免疫功能的影响[D]. 韩玲玲.扬州大学 2017
[3]REV感染对SPF雏鸡免疫器官免疫功能及Cyclin D1表达的影响[D]. 齐伟.东北农业大学 2017
[4]REV感染对鸡胚成纤维细胞凋亡及P53表达的影响[D]. 白玉.东北农业大学 2017
[5]细胞周期相关蛋白在人结肠癌组织中的表达及其临床意义的探讨[D]. 陈楚杰.广西医科大学 2017
[6]REV感染对SPF雏鸡免疫器官细胞凋亡及Bcl-2、C-myc基因表达的影响[D]. 侯宁.东北农业大学 2016
[7]Cyclin E蛋白表达与局部晚期乳腺癌新辅助化疗疗效相关性研究[D]. 朱恒光.南昌大学医学院 2015
[8]IBDV感染SPF雏鸡免疫器官细胞凋亡及相关基因表达变化[D]. 佟美姣.东北农业大学 2013
[9]REV感染SPF鸡中IL-6、IL-18和IFN-γ的定量检测[D]. 陈雪锋.山东农业大学 2012
[10]吴茱萸碱诱导人肝癌细胞HepG2细胞周期阻滞机制研究[D]. 刘溪.哈尔滨商业大学 2012
本文编号：3355725
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
细胞周期中Cyclin与CDK在不同时相的相互作用（引自百度图片）
该结构也叫周期素盒(cyclin box)，该部位能够结合 CDKs，并激活其发挥作用。该蛋白的 C 端也含有一个 PEST 序列，该序列与蛋白降解密切相关，还有研究发现，在 Cyclin E 第380 位苏氨酸可发生自身磷酸化，能够使 Cyclin E 发生降解，这一残基的磷酸化与泛素化路径处理有关。因此，Cyclin E 能通过上述两种方式降解。Cyclin E 在 G1 中期合成，细胞周期G1 期向 S 期过渡时含量最高，当进入 S 期后 Cyclin E 会被迅速降解，其含量急剧降低至消失[84]。（2）Cyclin E-CDK2 与增殖异常的关系 细胞异常增殖是肿瘤发生的重要前提，是由细胞周期调控相关蛋白表达异常所致。主要表现在细胞周期各个阶段的变化及 Cyclins、CDKs和 CKI 三者表达异常。随着人们对细胞周期相关研究的不断深入，对 Cyclin E 和 CDK2 认知更深，认为 Cyclin E 表达失调，使细胞周期中染色体稳定性变弱，从而造成细胞增殖异常，进而引起肿瘤的发生[85]。Cyclin E-CDK2 也是作用于 G1/S 期，与 Cyclin D-CDK4/6 具有协同作用，二者形成了对 Rb 蛋白磷酸化的阳性反馈回路，共同促进细胞由 G1 到 S 期的转换，因此，故 Cyclin E-CDK2 表达异常可使细胞的 G1-S 期调控失调，导致细胞增殖异常。有研究表明，通过 ATP 分子抑制剂来抑制 CDK2 活性，使 CDK2 和 Cyclin E 分离来降低 CDK2-CyclinE 复合物的活性水平，可阻止细胞进入 S 期[86]。据报道，在人结肠癌中，细胞周期蛋白 E和 CDK2 过度表达与人结肠癌的发展有密切联系[85]。因此，Cyclin E-CDK2 复合物的不正常表达与增殖异常密切相关。
EV 感染 SPF 雏鸡胸腺淋巴细胞凋亡变化 感染 1 日龄 SPF 雏鸡后 14-21 d，其胸腺淋巴细胞凋亡数量显著（P<0.0.01）高于对照雏鸡，其余未见统计学差异（P>0.05）（表 3-1，图 3-1 和表 3-1 REV 感染 SPF 雏鸡后第 14 和 21 d 胸腺淋巴细胞凋亡百分比变3-1 Changes of apoptosis percentage in thymus lymphocytes of SPF chicks infeREV at 14 and 21 days组别 groups C I14 1.82±0.23 6.45±0.62*21 2.97±0.37 5.67±0.46*C—对照组；I—REV 感染组*表示差异显著，P<0.05；**表示差异极显著，P<0.01；无标注表示差异不显著，P>C—control group; I—group infected with REVThe values with asterisk differ significantly(with single asterisk, P<0.05) or very significansterisk, P<0.01), and no significant(with no asterisk, P>0.05), the following is same as here
【参考文献】：
期刊论文
[1]镉对鸡胚成纤维细胞增殖和凋亡的影响[J]. 吴汉东,王会. 畜牧与兽医. 2018(01)
[2]网状内皮组织增殖病病毒免疫抑制状态下禽波氏菌对雏鸡致病性增强[J]. 杨萍萍,袁朋,魏凯,胡莉萍,朱瑞良. 畜牧兽医学报. 2017(08)
[3]高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒依赖Caspase途径诱导仔猪胸腺细胞凋亡[J]. 张冲,赵识非,王刚,于颖,刘永刚,常亚飞,涂亚斌,王淑杰,姜成刚,蔡雪辉. 中国预防兽医学报. 2016(12)
[4]网状内皮组织增生症病毒改良型LAMP检测方法的建立[J]. 曾婷婷,谢芝勋,谢丽基,刘加波,庞耀珊,范晴,罗思思,邓显文,谢志勤. 动物医学进展. 2013(08)
[5]传染性法氏囊病毒对SPF雏鸡免疫器官细胞凋亡及bcl-2mRNA表达的影响[J]. 佟美姣,高雪丽,李博韬,郑世民. 畜牧兽医学报. 2013(04)
[6]病毒感染对细胞周期调控影响的研究进展[J]. 周雪红,李凯. 微生物学免疫学进展. 2012(06)
[7]细胞周期中G1/S检验点的研究进展[J]. 舒丽娟. 中国医学工程. 2012(07)
[8]禽网状内皮组织增生病病毒套式PCR检测方法的建立[J]. 毕研丽,孙翠平,王金良,郭广君,吕素芳,苗立中,沈志强. 畜牧与兽医. 2011(12)
[9]Cyclin D1与细胞周期调控[J]. 卢梦玲,闫超,赖多,徐汉虹. 生物技术通报. 2011(10)
[10]禽网状内皮增生病毒囊膜基因gp90的克隆表达及ELISA方法的初步建立[J]. 余冲,黄勇,田明星,石敏,李敏,赵芳芳. 浙江大学学报(农业与生命科学版). 2011(04)
博士论文
[1]REV感染对SPF雏鸡miRNA及其靶基因mRNA表达的影响[D]. 于志强.东北农业大学 2017
[2]猪圆环病毒2型感染诱导PK-15细胞内质网应激与凋亡的机制研究[D]. 周莹珊.浙江大学 2016
[3]宿主波形蛋白在禽网状内皮组织增生病病毒感染中的作用机制研究[D]. 胡峰.中国农业科学院 2015
[4]禽网状内皮组织增生病基因工程亚单位疫苗及DNA疫苗的研制[D]. 李凯.中国农业科学院 2014
[5]黄芪多糖对人红白血病K562细胞增殖和凋亡的影响及机制[D]. 李超.南方医科大学 2014
[6]CyclinD1通过激活NDR调控细胞周期的机制研究[D]. 杜朝阳.中国科学技术大学 2013
[7]禽网状内皮组织增生病病毒与J-亚群白血病病毒的致病性及其疫苗研究[D]. 孙淑红.山东农业大学 2007
硕士论文
[1]丹东地区鸡传染性贫血病毒的分离鉴定及VP3蛋白促凋亡作用的研究[D]. 蔡静.沈阳农业大学 2017
[2]茶树油提取物粉对大小鼠免疫功能的影响[D]. 韩玲玲.扬州大学 2017
[3]REV感染对SPF雏鸡免疫器官免疫功能及Cyclin D1表达的影响[D]. 齐伟.东北农业大学 2017
[4]REV感染对鸡胚成纤维细胞凋亡及P53表达的影响[D]. 白玉.东北农业大学 2017
[5]细胞周期相关蛋白在人结肠癌组织中的表达及其临床意义的探讨[D]. 陈楚杰.广西医科大学 2017
[6]REV感染对SPF雏鸡免疫器官细胞凋亡及Bcl-2、C-myc基因表达的影响[D]. 侯宁.东北农业大学 2016
[7]Cyclin E蛋白表达与局部晚期乳腺癌新辅助化疗疗效相关性研究[D]. 朱恒光.南昌大学医学院 2015
[8]IBDV感染SPF雏鸡免疫器官细胞凋亡及相关基因表达变化[D]. 佟美姣.东北农业大学 2013
[9]REV感染SPF鸡中IL-6、IL-18和IFN-γ的定量检测[D]. 陈雪锋.山东农业大学 2012
[10]吴茱萸碱诱导人肝癌细胞HepG2细胞周期阻滞机制研究[D]. 刘溪.哈尔滨商业大学 2012
本文编号：3355725
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