牦牛β-防御素5基因的原核表达及乳腺特异性表达载体的构建

发布时间：2021-08-21 23:18

　　本研究以牦牛β-防御素5基因为研究对象，分别对牦牛β-防御素5基因进行原核和真核表达研究。原核表达以pET-32a（+）为表达载体，将构建好的重组原核表达载体转化大肠杆菌BL21（DE3）进行表达，检测其重组蛋白的体外抑菌活性。真核表达以奶牛β-酪蛋白基因（β-casein，CSN2）5’端和3’端为调控成分，牦牛β-防御素5基因CDS区为表达序列，构建牦牛β-防御素5基因乳腺特异性表达载体，将表达载体导入体外培养的牦牛乳腺上皮细胞，分析牦牛β-防御素5基因的表达效率。具体如下：1.采用RT-PCR方法从牦牛肺组织中扩增牦牛BNBD5基因成熟肽编码区及BNBD5基因开放阅读框。PCR产物经胶回收纯化后，克隆于pMD19-T载体的T位点。测序结果表明，获得了138bp的BNBD5成熟肽编码片段及219bp的开放阅读框，成熟肽编码45个氨基酸残基，内含6个位置保守的半胱氨酸残基。经遗传进化分析发现，该基因的序列与牛的mRNA同源性最高，可达到86.2%。2.将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21，于37°C06h间进行诱导表达，SDS-PAGE检测融合蛋白表达情况，并对该重组蛋白进行纯化测定其... 

【文章来源】：西南民族大学四川省

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

牦牛肺组织总RNA电泳图

牦牛BNBD5成熟肽的测序结果及氨基酸序列

牦牛与其他物种的BNBD5基因系统进化树分析

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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本文编号：3356510