布鲁氏菌强弱毒株诱导巨噬细胞凋亡机制初步研究

发布时间：2021-08-24 15:04

　　目的：布鲁氏菌病（Brucellosis）由是布鲁氏菌属（Brucella）成员引起的一种人畜共患传染病，通常能够长期持续的感染人畜，引起生殖器官损伤，一旦感染，难以治愈。布鲁氏菌病在全世界广泛存在爆发的情况下，给人类健康安全和农牧业经济都造成了巨大的威胁和损失，而且还可被作为一种恐怖战剂。布鲁氏菌是胞内寄生菌，革兰氏阴性菌，主要以胚胎滋养层细胞核巨噬细胞为宿主细胞。布鲁氏菌不产生外毒素，其毒力主要表现在侵袭力以及在宿主内的生存和繁殖能力。布鲁氏菌抑制巨噬细胞凋亡是其能够在宿主体内生长繁殖而不被机体免疫系统识别清除的主要原因。因此，通过对布鲁氏菌诱导巨噬细胞凋亡的机制的研究是研究布鲁氏菌病致病机制的基础。方法：（1）以布鲁氏菌强毒株16M、疫苗株M5-90感染巨噬细胞RAW264.7模型，建立布鲁氏菌株诱导巨噬细胞凋亡机制提供最佳感染复数。（2）布鲁氏菌强毒株16M、疫苗株M5-90分别以最佳感染复数感染巨噬细胞RAW264.7，比较强弱毒株诱导巨噬细胞凋亡的差异。（3）根据强弱毒株诱导巨噬细胞凋亡的差异，选取促进凋亡的菌株，探究caspase3、8、9在其诱导凋亡中的作用。（4）检测... 

【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区 211工程院校

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
前言
第一章 文献综述 布鲁氏菌在巨噬细胞致病机制的初步研究
    1、布鲁氏菌生物学特性
    2、布鲁氏菌的致病机制
        2.1 布鲁氏菌毒力因子
        2.2 布鲁氏菌的调理与非调理生活方式
        2.3 布鲁氏菌与自噬
        2.4 布鲁氏菌与凋亡
第二章 实验研究
    实验一 布鲁氏菌强毒株16M、疫苗株M5-90感染RAW264.7凋亡模型的建立
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 菌株与质粒
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 试验方法
                1.4.1 巨噬细胞RAW264.7的培养
                1.4.2 布鲁氏菌强毒株16M、疫苗株M5-90菌株培养及鉴定
                1.4.3 布鲁氏菌强毒株16M、疫苗株M5-90不同时间不同感染复数感染巨噬细胞RAW264.7凋亡率
        2 结果
            2.1 巨噬细胞的培养
            2.2 布鲁氏菌株PCR鉴定
            2.3 布鲁氏菌强毒株16M、疫苗株M5-90诱导巨噬细胞RAW264.7凋亡模型的建立
            2.4 不同时间布鲁氏菌胞内CFU计数
        3. 讨论
            3.1 布鲁氏菌与巨噬细胞
            3.2 布鲁氏菌感染模型
            3.3 布鲁氏菌强毒株16M与疫苗株M5-90的比较
        4 结论
    实验二 Caspae3、8、9对布鲁氏菌诱导RAW264.7凋亡的影响
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 菌株和细胞
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 方法
                1.4.1 布鲁氏菌强疫苗株诱导巨噬细胞凋亡率
                1.4.2 感染细胞caspase3、8、9表达量检测
                1.4.3 caspase3、8、9对凋亡的影响
                1.4.4 统计学分析
        2 结果
            2.1 布鲁氏菌强毒株16M、疫苗株M5-90诱导巨噬细胞凋亡率
            2.2 M5-90感染RAW264.7巨噬细胞24h后Caspase3、8、9的表达量
            2.3 抑制Caspase3、8、9后细胞感染24h凋亡率
        3 讨论
        4 结论
    实验三 布鲁氏菌强毒株16M、疫苗株M5-90诱导巨噬细胞凋亡线粒体途径相关因子的表达比较
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 细菌和细胞
            1.2 主要试剂
            1.3 主要仪器
            1.4 方法
                1.4.1 细胞培养
                1.4.2 ELISA检测布鲁氏菌强疫苗株感染巨噬细胞后TNF-a、cytc的表达变化
                1.4.3 实时定量PCR检测AIF、Bcl-2、Bax、Apaf-1、Bcl-xl的表达变化
        2 结果
            2.1 TNF-a和Cytc标准曲线的制作
            2.2 强疫苗株感染巨噬细胞后细胞内TNF-a和Cytc表达量
            2.3 实时定量PCR检测AIF、Bcl-2、Bax、Apaf-1、Bcl-xl的变化
            2.4 激光共聚焦检测Cytc共定位情况
        3 讨论
            3.1 布鲁氏菌与凋亡
            3.2 布鲁氏菌与线粒体途径相关凋亡因子
        4 结论
全文总结
参考文献
致谢
导师评阅表


【参考文献】：
期刊论文
[1]布鲁氏菌的致病机制与细胞免疫机制研究进展[J]. 董炳梅,王金良,唐娜,苗立中,沈志强.  中国人兽共患病学报. 2012(06)
[2]布鲁氏菌病流行趋势及其防治措施的研究进展[J]. 陈丹,柳晓琳,刘孝刚,程晓萍.  中国地方病防治杂志. 2011(01)
[3]伤寒沙门菌诱导巨噬细胞凋亡机制的探讨[J]. 刘婷婷,马丽娜,李凤云,刘勇,樊蓉.  中国人兽共患病学报. 2010(03)
[4]布鲁氏菌病的流行、发病原因及防治进展[J]. 周艳彬,柳晓琳.  辽宁医学院学报. 2010(01)
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[7]细胞凋亡信号传导通路的研究进展[J]. 杨绍杰,孟金萍,屈祎,刘云波.  中国比较医学杂志. 2007(05)
[8]细胞凋亡调控基因bcl-2和bax在肾上腺髓质增生大鼠肾上腺组织中的表达与意义[J]. 朱述琳,侯栋梁,薛现霞,邢佑敏.  西部医学. 2005(05)
[9]细胞凋亡通路研究进展[J]. 王海燕,王来栓.  国外医学(生理、病理科学与临床分册). 2003(05)
[10]动物布鲁氏菌病防治研究进展[J]. 毛开荣.  中国兽药杂志. 2003(09)

硕士论文
[1]羊种布鲁氏菌强毒株16M与疫苗株M5差异蛋白质组学分析[D]. 顾超慧.内蒙古农业大学 2009



本文编号：3360215