牛传染性鼻气管炎病毒多表位嵌合蛋白表达及免疫原性评价
发布时间：2021-08-29 23:29
牛传染性鼻气管炎是危害全球养牛业发展的一种急性传染病,病原为牛传染性鼻气管炎病毒（Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV）。IBRV感染牛体后,主要引起严重的呼吸道疾病、母牛的流产及其他神经性系统疾病。潜伏感染的特性给该病的防治及净化造成了极大困难。目前主要通过疫苗接种来防控此病。IBRV疫苗主要有灭活疫苗、弱毒疫苗、DNA疫苗、亚单位疫苗、基因缺失疫苗及活载体疫苗,但在一些方面仍存在诸多缺陷。因此,研发更有效的疫苗是防控IBR中最重要的问题。与传统的基因工程亚单位疫苗相比,多表位疫苗可克服MHC类分子的限制使其得到高效提呈,且能有效应对病原微生物的变异等,具有很好的应用前景。本研究首先将已鉴定出的IBRV的gB、gC和gD相关抗原表位及破伤风毒素通用T细胞表位P2以GGGGS或AAYAAY为接头进行串联连接,用DNASTAR Protean软件分析其抗原性以选择最佳连接组合,化学合成嵌合蛋白基因序列。构建pET-28a-P2-gB/gC/gD重组质粒,转化至E.coli BL21（DE3）感受态细胞表达重组蛋白。纯化后的重组蛋白与IS...
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
多表位串联序列抗原性分析结果
粒的鉴定 重组载体经 Nhe I 和的目的片段及约 520测序，测序结果与Mbp1 2蛋白三级结构预测结S)； B：P2-gB/gC/gombinant protein predictGGS); B: P2-gB/gC/gD
2.3.2 pET-28a-P2-gB/gC/gD 重组质粒的鉴定构建的 pET-28a-P2-gB/gC/gD 重组载体经 Nhe I 和 Hind III 双酶切后，进行 1%琼电泳分别可见 1125 bp 和 1173 bp 的目的片段及约 5200 bp 的载体条带，见图 2-4。将正确的质粒送至北京华大基因公司测序，测序结果与目的片段序列完全一致。Mbp7000―1 24000―2000―1000―图 2-3 重组蛋白三级结构预测结果A：P2-gB/gC/gD(GGGGS)； B：P2-gB/gC/gD(AAYAAY)；Fig.2-3 Tertiary structure of recombinant protein predicted by SWISS MODELA: P2-gB/gC/gD(GGGGS); B: P2-gB/gC/gD(AAYAAY)
【参考文献】：
期刊论文
[1]BVDV/IBRV主要抗原表位E2/gD基因串联表达及免疫原性[J]. 侯亚兰,侯佩莉,李杰,王洪梅,何洪彬. 吉林农业大学学报. 2014(01)
[2]牛传染性鼻气管炎病毒LNM株致弱疫苗免疫效力的研究[J]. 郭利,冷雪,张淑琴,苗立光,赵炳武,武华. 中国预防兽医学报. 2011(02)
[3]SDS-PAGE 法测定His-tag 融合蛋白分子量产生偏差的原因[J]. 唐威华,张景六,王宗阳,洪孟民. 植物生理学报. 2000(01)
硕士论文
[1]牛传染性鼻气管炎病毒糖蛋白gD单抗制备及其抗原表位鉴定与双抗夹心ELISA的建立[D]. 周跃辉.中国农业科学院 2015
[2]牛传染性鼻气管炎TK/gE基因缺失重组病毒的研究[D]. 定明.华中农业大学 2010
本文编号：3371588
【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省
【文章页数】：92 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
多表位串联序列抗原性分析结果
粒的鉴定 重组载体经 Nhe I 和的目的片段及约 520测序，测序结果与Mbp1 2蛋白三级结构预测结S)； B：P2-gB/gC/gombinant protein predictGGS); B: P2-gB/gC/gD
2.3.2 pET-28a-P2-gB/gC/gD 重组质粒的鉴定构建的 pET-28a-P2-gB/gC/gD 重组载体经 Nhe I 和 Hind III 双酶切后，进行 1%琼电泳分别可见 1125 bp 和 1173 bp 的目的片段及约 5200 bp 的载体条带，见图 2-4。将正确的质粒送至北京华大基因公司测序，测序结果与目的片段序列完全一致。Mbp7000―1 24000―2000―1000―图 2-3 重组蛋白三级结构预测结果A：P2-gB/gC/gD(GGGGS)； B：P2-gB/gC/gD(AAYAAY)；Fig.2-3 Tertiary structure of recombinant protein predicted by SWISS MODELA: P2-gB/gC/gD(GGGGS); B: P2-gB/gC/gD(AAYAAY)
【参考文献】：
期刊论文
[1]BVDV/IBRV主要抗原表位E2/gD基因串联表达及免疫原性[J]. 侯亚兰,侯佩莉,李杰,王洪梅,何洪彬. 吉林农业大学学报. 2014(01)
[2]牛传染性鼻气管炎病毒LNM株致弱疫苗免疫效力的研究[J]. 郭利,冷雪,张淑琴,苗立光,赵炳武,武华. 中国预防兽医学报. 2011(02)
[3]SDS-PAGE 法测定His-tag 融合蛋白分子量产生偏差的原因[J]. 唐威华,张景六,王宗阳,洪孟民. 植物生理学报. 2000(01)
硕士论文
[1]牛传染性鼻气管炎病毒糖蛋白gD单抗制备及其抗原表位鉴定与双抗夹心ELISA的建立[D]. 周跃辉.中国农业科学院 2015
[2]牛传染性鼻气管炎TK/gE基因缺失重组病毒的研究[D]. 定明.华中农业大学 2010
本文编号：3371588
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