猪繁殖与呼吸综合征病毒上调PGE 2 的机理研究
发布时间：2021-08-31 19:01
猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus, PRRSV）引起的以妊娠母猪繁殖障碍、小猪呼吸道症状为主要特征的严重猪传染疾病。高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（HP-PRRSV）于2006年首次在中国发现,以高热、高致病性、高死亡率为典型特征。已有的研究证明前列腺素E2（Prostaglandin E2, PGE2）是导致发热的关键因子,且环氧合酶1/2（COX-1/2）介导的酶促反应是PGE2合成过程中的关键限速步骤。但是HP-PRRSV引起高热背后的机制以及COX和PGE2在其中的作用目前仍不清楚。在本研究中,首先发现猪的死亡时间同小猪感染后期体温之间有明显的相关性,即感染后期体温越高的小猪死亡的时间也越早。并且HP-PRRSV显著增强感染小猪血清和肺泡灌洗液及感染PAMs（猪肺泡巨噬细胞）中PGE2的分泌。然后通过real-time PCR、western blot等方法我们发现PRRSV能够显著上调PAMs中COX-1的mRNA和蛋白水平。较COX-2的特异性抑制剂来说,CO...
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：97 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 引言
1.1 猪繁殖与呼吸综合征概述
1.1.1 历史与分布
1.1.2 临床症状
1.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒概述
1.2.1 病原
1.2.2 分子生物学特征
1.2.3 PRRSV的感染靶细胞与机制
1.3 PRRSV的流行病学特征
1.3.1 感染率高
1.3.2 易感动物
1.3.3 传播与防治
1.4 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒
1.5 发热
1.5.1 致热原和激活物的概念
1.5.2 致热源作用部位
1.5.3 致热原的作用方式
1.6 前列腺素E_2
1.6.1 PGE_2概述
1.6.2 PGE_2合成
1.6.3 PGE_2和发热
1.7 MAPK信号通路
1.7.1 MAPK
1.7.2 ERK1/2
1.7.3 p38 MAPK
1.8 Protein kinase C
1.9 CCAAT增强子结合蛋白β(CCAAT-enhancer-binding proteins,C/EBP-β
1.9.1 C/EBP
1.9.2 C/EBP-β
1.10 研究目的及意义
第二章 实验材料和研究方法
2.1 实验材料
2.1.1 仪器
2.1.2 主要实验试剂
2.1.3 试剂配制
2.1.4 菌种及质粒
2.1.5 病毒和细胞
2.1.6 细胞培养和病毒感染
2.1.7 病毒TCID50的检测方法
2.1.8 实验动物
2.2 实验方法
2.2.1 繁毒
2.2.2 病毒紫外灭活
2.2.3 攻毒以及体温检测
2.2.4 BALF(Bronchoalveolar lavage fluid)和血清的获取
2.2.5 原核表达质粒的构建及原核表达
2.2.6 多克隆抗体制备
2.2.7 流式细胞术检测PAMs胞内COX-1/2蛋白表达情况
2.2.8 实时定量PCR
2.2.9 信号通路抑制试验
2.2.10 Western blot实验
2.2.11 COX-1启动子和突变质粒的构建
2.2.12 质粒小量提取
2.2.13 质粒转染实验
2.2.14 双荧光素酶报告检测试验
2.2.15 siRNA试验
2.2.16 激光共聚焦
2.2.17 ELISA检测PGE_2量
2.2.18 细胞组分核质分离
2.2.19 染色质免疫共沉淀试验(ChIP)
2.2.20 统计学处理
第三章 PRRSV通过ERK1/2-C/EBP-β通路上调COX-1从而导致PGE_2上升
3.1 实验结果与分析
3.1.1 HP-PRRSV感染能够上调PGE_2水平
3.1.2 PRRSV感染PAMs上调COX-1的mRNA水平
3.1.3 COX-1多克隆抗体的制备
3.1.4 PRRSV感染PAMs能够上调COX-1蛋白水平的表达
3.1.5 HP-PRRSV能够通过上调COX-1引起PGE_2表达升高
3.1.6 PRRSV通过MEK-ERK1/2信号通路诱导COX-1表达
3.1.7 猪COX-1启动子的克隆和序列分析
3.1.8 HP-PRRSV通过诱导C/EBP-β磷酸化来激活COX-1表达
3.2 讨论
3.2.1 HP-PRRSV导致致热源PGE_2的分泌增加
3.2.2 HP-PRRSV上调COX-1而不是COX-2并促进PGE_2的分泌
3.2.3 HP-PRRSV通过ERK1/2-p-C/EBP-β途径激活COX-1
结论
参考文献
致谢
个人简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]The Interferon Signaling Network and Transcription Factor C/EBP-β[J]. Padmaja Gade,Dhan V.Kalvakolanu. Cellular & Molecular Immunology. 2007(06)
本文编号：3375443
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：97 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第一章 引言
1.1 猪繁殖与呼吸综合征概述
1.1.1 历史与分布
1.1.2 临床症状
1.2 猪繁殖与呼吸综合征病毒概述
1.2.1 病原
1.2.2 分子生物学特征
1.2.3 PRRSV的感染靶细胞与机制
1.3 PRRSV的流行病学特征
1.3.1 感染率高
1.3.2 易感动物
1.3.3 传播与防治
1.4 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒
1.5 发热
1.5.1 致热原和激活物的概念
1.5.2 致热源作用部位
1.5.3 致热原的作用方式
1.6 前列腺素E_2
1.6.1 PGE_2概述
1.6.2 PGE_2合成
1.6.3 PGE_2和发热
1.7 MAPK信号通路
1.7.1 MAPK
1.7.2 ERK1/2
1.7.3 p38 MAPK
1.8 Protein kinase C
1.9 CCAAT增强子结合蛋白β(CCAAT-enhancer-binding proteins,C/EBP-β
1.9.1 C/EBP
1.9.2 C/EBP-β
1.10 研究目的及意义
第二章 实验材料和研究方法
2.1 实验材料
2.1.1 仪器
2.1.2 主要实验试剂
2.1.3 试剂配制
2.1.4 菌种及质粒
2.1.5 病毒和细胞
2.1.6 细胞培养和病毒感染
2.1.7 病毒TCID50的检测方法
2.1.8 实验动物
2.2 实验方法
2.2.1 繁毒
2.2.2 病毒紫外灭活
2.2.3 攻毒以及体温检测
2.2.4 BALF(Bronchoalveolar lavage fluid)和血清的获取
2.2.5 原核表达质粒的构建及原核表达
2.2.6 多克隆抗体制备
2.2.7 流式细胞术检测PAMs胞内COX-1/2蛋白表达情况
2.2.8 实时定量PCR
2.2.9 信号通路抑制试验
2.2.10 Western blot实验
2.2.11 COX-1启动子和突变质粒的构建
2.2.12 质粒小量提取
2.2.13 质粒转染实验
2.2.14 双荧光素酶报告检测试验
2.2.15 siRNA试验
2.2.16 激光共聚焦
2.2.17 ELISA检测PGE_2量
2.2.18 细胞组分核质分离
2.2.19 染色质免疫共沉淀试验(ChIP)
2.2.20 统计学处理
第三章 PRRSV通过ERK1/2-C/EBP-β通路上调COX-1从而导致PGE_2上升
3.1 实验结果与分析
3.1.1 HP-PRRSV感染能够上调PGE_2水平
3.1.2 PRRSV感染PAMs上调COX-1的mRNA水平
3.1.3 COX-1多克隆抗体的制备
3.1.4 PRRSV感染PAMs能够上调COX-1蛋白水平的表达
3.1.5 HP-PRRSV能够通过上调COX-1引起PGE_2表达升高
3.1.6 PRRSV通过MEK-ERK1/2信号通路诱导COX-1表达
3.1.7 猪COX-1启动子的克隆和序列分析
3.1.8 HP-PRRSV通过诱导C/EBP-β磷酸化来激活COX-1表达
3.2 讨论
3.2.1 HP-PRRSV导致致热源PGE_2的分泌增加
3.2.2 HP-PRRSV上调COX-1而不是COX-2并促进PGE_2的分泌
3.2.3 HP-PRRSV通过ERK1/2-p-C/EBP-β途径激活COX-1
结论
参考文献
致谢
个人简介
【参考文献】：
期刊论文
[1]The Interferon Signaling Network and Transcription Factor C/EBP-β[J]. Padmaja Gade,Dhan V.Kalvakolanu. Cellular & Molecular Immunology. 2007(06)
本文编号：3375443
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3375443.html
