稳定表达萤火虫荧光素酶报告基因的猪瘟病毒的构建及其在抗病毒试验中的应用

发布时间：2021-09-01 00:01

　　猪瘟病毒（Classical swine fever virus, CSFV）是猪瘟（Classical swine fever, CSF）的病原,猪瘟对养猪业的危害巨大,常造成重大经济损失,也是我国计划要消灭的重大动物疫病之一。目前,对猪瘟疫情的防控主要是通过疫苗接种和对感染猪瘟病毒的猪进行严格扑杀和对周边地区进行消毒防疫。我国在国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020年）中将猪瘟列入优先防治的6种动物疫病之一,并计划进一步扩大猪瘟净化区域。为了快速检测CSFV抗体效价,判断疫苗免疫状况,建立针对CSFV特异性抑制剂的高通量筛选方法。本研究利用反向遗传学技术拯救了一株能够稳定表达萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase, Flue）基因的猪瘟报告病毒CSFV-Npro Fluc通过重叠PCR的方法将Fhuc基因克隆到基于RNA聚合酶Ⅱ的Shimen株全长感染性cDNA克隆pBRCISM的Npro编码区内。经RT-PCR、抗原捕获ELISA、间接免疫荧光试验（IFA）和实时荧光定量PCR （real-time-PCR）检测显示病毒构建成功。测定病毒生长曲线后发现该报告... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：42 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

CSFV基因组结构示意图（引自Murrayetal.，2008)

CSFV的生命周期（引自Murrayetal.，2008)

全长cDNA感染性克隆pBRCISM-NP『°Fluc的构建策略


本文编号：3375870