鸡弓形虫致密颗粒蛋白截短基因sGRA8的克隆表达及ELISA诊断方法的建立

发布时间：2021-09-02 20:08

　　弓形虫病（Toxoplasmosis）是一种由刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）引起的世界性分布人畜共患寄生虫病,人和动物的感染率都很高,严重危害人类健康,对孕妇和免疫缺陷、免疫抑制患者的损害尤甚,并给世界各国的畜牧业造成巨大的经济损失。国内散养鸡群中的弓形虫病感染不容忽视,平均在30%左右。人类通过接触病鸡或食用未煮熟的鸡可感染弓形虫,因此加强对鸡弓形虫感染的检测,对防控弓形虫病及人类健康有着重要的公共卫生学意义。目前,对畜禽弓形虫感染的检测手段主要有病原学诊断、免疫学诊断和核酸检测技术三类。ELISA法具有灵敏性高、特异性高、重复性好等特点,且对检测设备要求不高,是一种优良的检测手段。市场上销售的检测鸡弓形虫抗体的ELISA试剂盒特异性差、抗体检出时间短,对感染后期的抗体无法检出。近些年在国内外,关于猪、牛、羊等家畜动物弓形虫感染及抗体检测技术的研究和报道较多,但对鸡等禽类弓形虫感染检测的研究较少。本实验室对GRA8全基因进行了克隆表达,并进行了Western blot和ELISA验证,表明GRA8是一种具有很好诊断价值的鸡弓形虫病诊断抗原,但由于GRA8基因被正确插... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
前言
第一篇 文献综述
    第一章 弓形虫与弓形虫病
        1 弓形虫简介
            1.1 病原学
            1.2 生活史
            1.3 弓形虫对环境的抵抗力
        2 弓形虫病的流行病学概况
            2.1 猪的弓形虫病
            2.2 羊的弓形虫病
            2.3 人的弓形虫病
            2.4 犬猫的弓形虫病
            2.5 鸡的弓形虫病
        3 弓形虫病的防治
            3.1 弓形虫病的预防
            3.2 弓形虫病的治疗
        参考文献
    第二章 弓形虫病的实验诊断
        1 病原学诊断
            1.1 组织学诊断
            1.2 动物接种或组织培养
        2 分子学诊断
            2.1 核酸分子杂交技术
            2.2 聚合酶链反应(PCR)
            2.3 基因芯片技术
        3 免疫学诊断
            3.1 间接红细胞血凝试验(IHA)
            3.2 酶免疫技术(EIA)
        4 ELISA抗体检测试剂盒存在的问题
        参考文献
第二篇 试验研究
    第三章 鸡弓形虫致密颗粒蛋白GRA8的截短表达
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 实验方法
        2 实验结果
            2.1 蛋白质信号肽预测
            2.2 蛋白质跨膜区、亲疏水性、抗原性预测
            2.3 截短基因的PCR扩增
            2.4 pMD19T-sGRA8的构建
            2.5 pCold TF-sGRA8的构建
            2.6 截短型重组蛋白的诱导表达
            2.7 截短型重组蛋白在E.coli BL21中的分布
            2.8 截短重组蛋白的纯化
            2.9 截短型重组蛋白的Western blot结果
        3 讨论
        参考文献
    第四章 sGRA8-ELISA检测方法的建立
        1 实验材料
            1.1 实验动物
            1.2 虫株及其他重要血清
            1.3 菌种
            1.4 主要仪器
            1.5 主要试剂及耗材
        2 实验方法
            2.1 虫株的复苏、扩增与纯化
            2.2 鸡弓形虫人工感染血清的采集
            2.3 sGRA8-ELISA方法的建立
            2.4 sGRA8-ELISA法的操作步骤
            2.5 ELISA阴、阳性判定标准的确定
            2.6 特异性试验
            2.7 重复性试验
            2.8 敏感性试验
            2.9 与进口试剂盒数据比较
        3 实验结果
            3.1 sGRA8-ELISA方法建立的结果
            3.2 ELISA阴、阳性判定标准的确定
            3.3 特异性试验
            3.4 重复性试验
            3.5 敏感性试验
            3.6 与进口试剂盒数据比较
        4 讨论
        参考文献
全文总结
致谢
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]青海省化隆县牛羊弓形虫病血清学调查[J]. 康明,李英,石文辉,任旭荣,张春霞,张丽婕.  畜牧与兽医. 2013(10)
[2]国外羊弓形虫感染情况及影响因素研究进展[J]. 郑斌,尹志奎,韩丁丁,亢彩彩.  中国病原生物学杂志. 2013(06)
[3]浦东新区犬猫弓形虫病血清学调查分析[J]. 俞向前,文德亮,龚大弟,张忠海,龚俊文,孙福华,王卫国,张巧英,叶承荣.  上海畜牧兽医通讯. 2013(02)
[4]鸡弓形虫病研究进展[J]. 龙祥,舒兰,陈雪娇,江涛.  长江大学学报(自科版). 2013(11)
[5]川渝两地猪弓形体血清流行病学调查[J]. 翟少钦,付文贵,郑华,付利芝.  中国兽医杂志. 2013(02)
[6]浅谈猪弓形体病的诊断及防治[J]. 丘全强,江冬梅,管坚章.  中国畜牧兽医文摘. 2013(01)
[7]鸡源弓形虫治疗药物的筛选[J]. 王帅,赵光伟,谢青,王望,张梦,Hassan I A,李锐,李祥瑞.  中国兽医科学. 2012(11)
[8]Isolation and Molecular Characterization of Toxoplasma gondii from Chickens in China[J]. Hassan Ibrahim Adam.  Journal of Integrative Agriculture. 2012(08)
[9]犬猫弓形虫病的流行及防控[J]. 马明筠,谭革,姜汹,欧阳艳.  湖北畜牧兽医. 2012(08)
[10]弓形虫病研究概况[J]. 王跃兵,杨向东,杨国荣,于彬彬,黄文丽,马永康.  中国热带医学. 2012(04)

博士论文
[1]四株不同动物来源弓形虫感染小鼠和鸡免疫病理变化的比较研究[D]. 赵光伟.南京农业大学 2012

硕士论文
[1]荆州市鸡弓形虫病血清学调查[D]. 龙祥.长江大学 2013
[2]鸡弓形虫诊断抗原的筛选[D]. 李锐.南京农业大学 2012
[3]我国部分地区鸡、猪及几种淡水生物弓形虫感染情况调查[D]. 张梦.南京农业大学 2012
[4]我国部分地区鸡群弓形虫感染情况调查[D]. 沈博.南京农业大学 2010



本文编号：3379651