DHAV-1感染DEF和鸭的细胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA表达水平研究
发布时间：2021-09-05 09:15
鸭甲肝病毒A型（Duck Hepatitis A Virus, DHAV-1）属于小RNA病毒科,禽肝炎病毒属。DHAV-1主要引起10d以内的雏鸭出现以肝损伤为特征的鸭病毒性肝炎病,该病传播迅速、致死性高,雏鸭一旦感染该病,死亡率高达90%以上,这给我国的养鸭业带来巨大的经济损失。本试验以DHAV-1分别感染原代鸭胚成纤维细胞（DEF）、4d雏鸭和21d中鸭,于DEF感染DHAV-1后的0h对照组和6h、12h、24h、48h、72h、96h试验组收取DEF,检测DEF中病毒含量和细胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA表达水平。DHAV-1感染DEF后,在24h致细胞病变,经RT-qPCR检测病毒RNA增殖情况,DHAV-1在感染DEF后的6h-48h上升,48h到达高峰,而后下降。并于24h在透射电镜下观察到直径在30rnm左右的球形病毒颗粒。上述结果表明,本试验成功建立DHAV-1细胞感染模型。DEF感染DHAV-1后,细胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ在6h-72h上调,96h下调,并存在显著差异。于DHAV-1感染后0h对照组与6h,12h、24h...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
前言
1 鸭甲肝病毒A型(DHAV-1)概述
1.1 DHAV-1简介
1.2 DHAV-1致病机制的研究现状
1.3 DHAV-1细胞培养现状
2 白细胞介素-2(IL-2)概述
3 白细胞介素-12-B(IL-12-B)概述
4 干扰素-γ(IFN-γ)概述
5 细胞因子的关系与信号转导
6 本研究的目的与意义
材料和方法
1 试验仪器及材料
1.1 主要仪器设备
1.2 主要试剂
1.3 供试毒株
1.4 试验动物
2 试验方法
2.1 原代鸭胚成纤维细胞的分离培养
2.2 DHAV-1郑株细胞半数感染量(TICD_(50))测定
2.3 细胞病变的形态学观察
2.3.1 倒置显微镜观察
2.3.2 光镜观察
2.3.3 透射电镜观察
2.4 试验动物的饲养和处理
2.5 DHAV-1郑株鸭胚半数致死量(ELD_(50))测定
2.6 试验动物攻毒与取材
2.7 细胞与组织总RNA的提取
2.8 总RNA的反转录
2.9 PCR方法检测
2.10 RT-qPCR测定DEF与鸭组织中病毒含量
2.11 RT-qPCR检测细胞与组织中细胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA表达水平
2.11.1 引物设计
2.11.2 反应体系的配置
2.11.3 数据统计与处理
结果与分析
1 DEF试验部分
1.1 DHAV-1郑株细胞半数感染量(TICD_(50))测定
1.2 细胞病变形态学观察
1.2.1 倒置显微镜下观察细胞形态
1.2.2 光镜下观察细胞病变
1.2.3 超微细胞病理学变化
1.3 RT-PCR检测细胞内病毒核酸RNA结果
1.4 RT-qPCR测定细胞内病毒含量
1.5 细胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA在细胞中的表达水平变化
2 动物试验部分
2.1 DHAV-1郑株鸭胚半数致死量(ELD_(50))测定
2.2 4d雏鸭与21d中鸭接种DHAV-1后解剖学观察
2.3 RT-PCR检测4d雏鸭和21d中鸭肝脏的病毒核酸RNA结果
2.4 RT-qPCR检测4d雏鸭与21d中鸭肝、脾、胸腺、法氏囊中DHAV-1病毒含量变化
2.5 细胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA在细胞中的表达水平变化
2.5.1 细胞因子IL-2基因mRNA在4d雏鸭和21d中鸭肝、脾、胸腺、法氏囊中的表达水平变化
2.5.2 细胞因子IL-12-B基因mRNA在4d雏鸭和21d中鸭肝、脾、胸腺、法氏囊中的表达水平变化
2.5.3 细胞因子IFN-γ基因mRNA在4d雏鸭和21d中鸭肝、脾、胸腺、法氏囊中的表达水平变化
讨论
1 DHAV-1形态特点及质细胞病变特点
2 DHAV-1在原代DEF中的增殖特点
3 DVAH-1感染原代DEF后细胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA的表达水平分析
4 DHAV-1在鸭体内的增殖特点
4.1 DHAV-1在4d雏鸭与21d中鸭肝脏中的增殖特点
4.2 DHAV-1在4d雏鸭与21d中鸭脾脏中的增殖特点
4.3 DHAV-1在4d雏鸭与21d中鸭胸腺中的增殖特点
4.4 DHAV-1在4d雏鸭与21d中鸭法氏囊中的增殖特点
5 鸭感染DHAV-1后细胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA的表达水平分析
5.1 4d雏鸭与21d中鸭感染DHAV-1后细胞因子IL-2的表达水平
5.2 4d雏鸭与21d中鸭感染DHAV-1后细胞因子IL-12-B的表达水平
5.3 4d雏鸭与21d中鸭感染DHAV-1后细胞因子IFN-γ的表达水平
6 DEF与鸭体内病毒含量与细胞因子表达水平的异同
结论
参考文献
致谢
本文编号：3385078
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：65 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
前言
1 鸭甲肝病毒A型(DHAV-1)概述
1.1 DHAV-1简介
1.2 DHAV-1致病机制的研究现状
1.3 DHAV-1细胞培养现状
2 白细胞介素-2(IL-2)概述
3 白细胞介素-12-B(IL-12-B)概述
4 干扰素-γ(IFN-γ)概述
5 细胞因子的关系与信号转导
6 本研究的目的与意义
材料和方法
1 试验仪器及材料
1.1 主要仪器设备
1.2 主要试剂
1.3 供试毒株
1.4 试验动物
2 试验方法
2.1 原代鸭胚成纤维细胞的分离培养
2.2 DHAV-1郑株细胞半数感染量(TICD_(50))测定
2.3 细胞病变的形态学观察
2.3.1 倒置显微镜观察
2.3.2 光镜观察
2.3.3 透射电镜观察
2.4 试验动物的饲养和处理
2.5 DHAV-1郑株鸭胚半数致死量(ELD_(50))测定
2.6 试验动物攻毒与取材
2.7 细胞与组织总RNA的提取
2.8 总RNA的反转录
2.9 PCR方法检测
2.10 RT-qPCR测定DEF与鸭组织中病毒含量
2.11 RT-qPCR检测细胞与组织中细胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA表达水平
2.11.1 引物设计
2.11.2 反应体系的配置
2.11.3 数据统计与处理
结果与分析
1 DEF试验部分
1.1 DHAV-1郑株细胞半数感染量(TICD_(50))测定
1.2 细胞病变形态学观察
1.2.1 倒置显微镜下观察细胞形态
1.2.2 光镜下观察细胞病变
1.2.3 超微细胞病理学变化
1.3 RT-PCR检测细胞内病毒核酸RNA结果
1.4 RT-qPCR测定细胞内病毒含量
1.5 细胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA在细胞中的表达水平变化
2 动物试验部分
2.1 DHAV-1郑株鸭胚半数致死量(ELD_(50))测定
2.2 4d雏鸭与21d中鸭接种DHAV-1后解剖学观察
2.3 RT-PCR检测4d雏鸭和21d中鸭肝脏的病毒核酸RNA结果
2.4 RT-qPCR检测4d雏鸭与21d中鸭肝、脾、胸腺、法氏囊中DHAV-1病毒含量变化
2.5 细胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA在细胞中的表达水平变化
2.5.1 细胞因子IL-2基因mRNA在4d雏鸭和21d中鸭肝、脾、胸腺、法氏囊中的表达水平变化
2.5.2 细胞因子IL-12-B基因mRNA在4d雏鸭和21d中鸭肝、脾、胸腺、法氏囊中的表达水平变化
2.5.3 细胞因子IFN-γ基因mRNA在4d雏鸭和21d中鸭肝、脾、胸腺、法氏囊中的表达水平变化
讨论
1 DHAV-1形态特点及质细胞病变特点
2 DHAV-1在原代DEF中的增殖特点
3 DVAH-1感染原代DEF后细胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA的表达水平分析
4 DHAV-1在鸭体内的增殖特点
4.1 DHAV-1在4d雏鸭与21d中鸭肝脏中的增殖特点
4.2 DHAV-1在4d雏鸭与21d中鸭脾脏中的增殖特点
4.3 DHAV-1在4d雏鸭与21d中鸭胸腺中的增殖特点
4.4 DHAV-1在4d雏鸭与21d中鸭法氏囊中的增殖特点
5 鸭感染DHAV-1后细胞因子IL-2、IL-12-B、IFN-γ基因mRNA的表达水平分析
5.1 4d雏鸭与21d中鸭感染DHAV-1后细胞因子IL-2的表达水平
5.2 4d雏鸭与21d中鸭感染DHAV-1后细胞因子IL-12-B的表达水平
5.3 4d雏鸭与21d中鸭感染DHAV-1后细胞因子IFN-γ的表达水平
6 DEF与鸭体内病毒含量与细胞因子表达水平的异同
结论
参考文献
致谢
本文编号：3385078
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