基于Cre/LoxP系统的皮肤特异性表达HIF-1α基因载体构建及鉴定

发布时间：2021-09-07 08:14

　　毛发是由皮肤演变而来的皮肤附属物,一般哺乳动物的毛发要经过毛囊的发育和分化过程,这个过程与很多功能基因、生长因子有关。通过转基因技术,已经能够成功地把外源基因转到哺乳动物细胞内,促进其毛发的生长,获得高产优质的转基因动物。同时,我们也必须解决转基因产品的安全性。所以,怎样去除外源基因附属携带的标记元件是解决这个问题的关键。本研究应用了Cre-LoxP重组酶系统的特异敲除功能,对构建好pKH-L载体中的HIF-1α基因,进行条件选择性的删除,因此转基因技术产物的安全性得到了很大的提高。也为转基因内蒙古绒山羊的培育提供了真核表达载体。首先以内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞cDNA为模板,PCR克隆HIF-1α基因,测序正确后,以pKT-L载体为基础,pMD19T为中间载体,构建pKH-L真核表达载体（功能元件顺序K14-HIF-1α-PolyA-LoxP-CDsRed-LoxP）,转染成纤维细胞和皮肤成纤维细胞用脂质体介导法,后经荧光检测转染效率均达到65%。测定HIF-1α基因的mRNA在两种成纤维细胞中的表达程度用荧光定量PCR的方法,结果显示HIF-1α基因在转染pKH-L的皮肤成纤维细... 

【文章来源】：内蒙古大学内蒙古自治区 211工程院校

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRUCT
缩略词表
引言
    参考文献
第一章 HIF-1α基因的克隆
    1 材料与方法
    2 结果与分析
    3 讨论
第二章 基于Cre/LoxP系统的皮肤特异性表达HIF-1α因真核表达载体的构建
    1 材料与方法
    2 结果与分析
    3 讨论
    参考文献
第三章 真核表达载体pKH-L转染细胞及HIF-1α基因的表达检测
    1 材料与方法
    2 结果与分析
    3 讨论
    参考文献
第四章 结论
第五章 文献综述
    1 低氧诱导因子α
    2 cre-loxp系统
    3 角蛋白K14启动子
    4 内蒙古白绒山羊
    参考文献
致谢
攻读硕士学位期间所发表的学术论文



本文编号：3389204