副猪嗜血杆菌致病猪呼吸道蛋白酶激活受体2的定位与表达研究
发布时间：2021-09-07 21:05
副猪嗜血杆菌病是一种由副猪嗜血杆菌引起的以致病猪发生咳嗽、呼吸困难、跛行等症状为主的一类呼吸道疾病,随着养猪业规模的扩大,副猪嗜血杆菌病已经严重危害到养猪业的发展。蛋白酶激活受体2（proteinase-activated receptor-2, PAR-2）是G蛋白偶联受体家族成员之一,在生物体的多个组织器官都有表达,尤其是容易发生变态反应的组织如呼吸道组织、胃肠道组织等,PAR-2激活后可以刺激细胞分泌多种炎性介质和细胞因子,参与多种生理病理反应过程,并发挥调控作用。目前关于PAR-2的研究大多是采用人和大鼠的疾病模型,在猪尤其是自然感染病原的致病猪方面的研究还不多,本实验通过（疑似感染副猪嗜血杆菌的病猪）采集病猪呼吸道组织,进行细菌革兰氏染色及PCR鉴定确诊感染病原为副猪嗜血杆菌,HE染色观察病猪呼吸道的病理变化,免疫组织化学和实时荧光定量检测PCR-2在病猪呼吸道的定位与表达变化,从而研究副猪嗜血杆菌致病猪呼吸道蛋白酶激活受体2的分布、表达及意义。结果分析显示：（1）通过鉴定,确定所感染的病原为副猪嗜血杆菌。（2）HE染色观察致病猪：部分气道粘膜上皮细胞变性、脱落并且气道的完整...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩写词汇表
第一部分 文献综述
1 蛋白酶激活受体研究进展
1.1 概述
1.2 蛋白酶激活受体2研究概述
1.2.1 结构及激活方式
1.2.2 蛋白酶激活受体2的分布及生物学意义
2 副猪嗜血杆菌病概述
2.1 概述
2.2 副猪嗜血杆菌病的诊断
2.3 副猪嗜血杆菌病的免疫及药物防治
3 免疫组织化学技术在科学研究中的应用
第二部分 实验部分
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 主要试剂及耗材
1.3 其他试剂及耗材
1.4 主要溶液的配制
1.5 主要仪器设备
2 试验方法
2.1 取材
2.2 副猪嗜血杆菌的鉴定
2.2.1 细菌的革兰氏染色
2.2.2 细菌的PCR鉴定
2.3 病理组织学观察
2.3.1 组织蜡块制作
2.3.2 组织切片制作
2.3.3 HE染色
2.3.4 免疫组织化学检测
2.3.5 观察与拍照
2.4 基因水平的表达研究
2.4.1 总RNA的提取
2.4.2 总RNA的逆转录反应
2.4.3 荧光定量PCR反应
3 实验结果
3.1 副猪嗜血杆菌病的病理学观察
3.2 副猪嗜血杆菌的鉴定
3.2.1 革兰氏染色
3.2.2 细菌的PCR鉴定
3.3 副猪嗜血杆菌致病猪呼吸道的病理组织学结果观察
3.3.1 HE染色
3.3.2 免疫组织化学染色结果
3.4 基因表达水平结果
3.4.1 总RNA提取
3.4.2 PAR-2的RT-PCR扩增
3.4.3 荧光定量检测结果
第三部分 讨论与小结
1 讨论
1.1 副猪嗜血杆菌与呼吸道疾病
1.2 PAR-2在呼吸道的定位分析
1.3 PAR-2在呼吸道中的作用
1.4 实验技术方法的讨论
2 小结
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]副猪嗜血杆菌病的危害与防治[J]. 蔡旭旺,陈焕春,吴斌,刘正飞. 养殖与饲料. 2003(05)
博士论文
[1]蛋白酶激活受体2在早期断奶仔猪胃肠黏膜屏障中作用研究[D]. 裴小英.华中农业大学 2010
[2]副猪嗜血杆菌的分离鉴定及诊断方法与灭活疫苗的研究[D]. 蔡旭旺.华中农业大学 2006
[3]蛋白酶激活受体2活化对呼吸和循环功能的影响[D]. 苏枭.复旦大学 2004
硕士论文
[1]猪气管上皮细胞的永生化及副猪嗜血杆菌对其黏附能力的研究[D]. 王津津.西北农林科技大学 2010
本文编号：3390247
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
英文缩写词汇表
第一部分 文献综述
1 蛋白酶激活受体研究进展
1.1 概述
1.2 蛋白酶激活受体2研究概述
1.2.1 结构及激活方式
1.2.2 蛋白酶激活受体2的分布及生物学意义
2 副猪嗜血杆菌病概述
2.1 概述
2.2 副猪嗜血杆菌病的诊断
2.3 副猪嗜血杆菌病的免疫及药物防治
3 免疫组织化学技术在科学研究中的应用
第二部分 实验部分
1 实验材料
1.1 实验动物
1.2 主要试剂及耗材
1.3 其他试剂及耗材
1.4 主要溶液的配制
1.5 主要仪器设备
2 试验方法
2.1 取材
2.2 副猪嗜血杆菌的鉴定
2.2.1 细菌的革兰氏染色
2.2.2 细菌的PCR鉴定
2.3 病理组织学观察
2.3.1 组织蜡块制作
2.3.2 组织切片制作
2.3.3 HE染色
2.3.4 免疫组织化学检测
2.3.5 观察与拍照
2.4 基因水平的表达研究
2.4.1 总RNA的提取
2.4.2 总RNA的逆转录反应
2.4.3 荧光定量PCR反应
3 实验结果
3.1 副猪嗜血杆菌病的病理学观察
3.2 副猪嗜血杆菌的鉴定
3.2.1 革兰氏染色
3.2.2 细菌的PCR鉴定
3.3 副猪嗜血杆菌致病猪呼吸道的病理组织学结果观察
3.3.1 HE染色
3.3.2 免疫组织化学染色结果
3.4 基因表达水平结果
3.4.1 总RNA提取
3.4.2 PAR-2的RT-PCR扩增
3.4.3 荧光定量检测结果
第三部分 讨论与小结
1 讨论
1.1 副猪嗜血杆菌与呼吸道疾病
1.2 PAR-2在呼吸道的定位分析
1.3 PAR-2在呼吸道中的作用
1.4 实验技术方法的讨论
2 小结
参考文献
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]副猪嗜血杆菌病的危害与防治[J]. 蔡旭旺,陈焕春,吴斌,刘正飞. 养殖与饲料. 2003(05)
博士论文
[1]蛋白酶激活受体2在早期断奶仔猪胃肠黏膜屏障中作用研究[D]. 裴小英.华中农业大学 2010
[2]副猪嗜血杆菌的分离鉴定及诊断方法与灭活疫苗的研究[D]. 蔡旭旺.华中农业大学 2006
[3]蛋白酶激活受体2活化对呼吸和循环功能的影响[D]. 苏枭.复旦大学 2004
硕士论文
[1]猪气管上皮细胞的永生化及副猪嗜血杆菌对其黏附能力的研究[D]. 王津津.西北农林科技大学 2010
本文编号：3390247
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